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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot实验交流
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liushang1990

木虫 (小有名气)

[求助] western blot实验交流

western blot结果，目标条带时有时无，而内参一般都还比较好，转膜Marker也很清晰，不知道如何解释。（一抗过夜；二抗室温一小时；转膜80V，1h；封闭5%牛奶室温1h）
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基督耶稣降世，为要拯救罪人。
1楼 2013-09-13 14:11:19
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liushang1990

木虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by ykluuniu at 2013-09-15 21:19:27
1.一抗没孵上，可能出现你这个结果。
2.上样量多少？如果目的蛋白表达特别低呢？
3.一抗是哪个公司的？质量怎么样？
4.一抗按多大比例稀释能做出来？
5.0.2umPVDF膜，湿转100V 1.5小时，我是这样做的，从10几kD ...

谢谢！
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基督耶稣降世，为要拯救罪人。
13楼2013-09-17 17:35:15
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八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-13 22:24:06
楼主信息量太少！目标蛋白多大？你用的什么膜？湿转还是干转？？背景如何？是否有非特异性条带出现？最好把内参和目的的图像一起拿出来看看
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2楼2013-09-13 14:58:44
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zhangyoujian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品是不是同一个样品？条带没有出现是我们会重洗洗膜后再按孵一抗和二抗
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3楼2013-09-14 08:57:25
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liushang1990

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangyoujian at 2013-09-14 08:57:25
样品是不是同一个样品？条带没有出现是我们会重洗洗膜后再按孵一抗和二抗

是同一个样品，怎么洗啊？TBST？
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基督耶稣降世，为要拯救罪人。
4楼2013-09-14 09:39:07
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