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liushang1990

木虫 (小有名气)

[求助] western blot实验交流

western blot结果,目标条带时有时无,而内参一般都还比较好,转膜Marker也很清晰,不知道如何解释。(一抗过夜;二抗室温一小时;转膜80V,1h;封闭5%牛奶室温1h)
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基督耶稣降世,为要拯救罪人。
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liushang1990

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by guxinhan123 at 2013-09-14 21:25:36
应该是抗体问题,抗体有没有过冻融?拿分装过没有冻融的抗体试下,或者可以加大一抗的浓度试试,内参能出来转膜应该没问题

没有冻融过,一抗浓度已经很高了
基督耶稣降世,为要拯救罪人。
10楼2013-09-15 18:10:18
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八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-13 22:24:06
楼主信息量太少!目标蛋白多大?你用的什么膜?湿转还是干转??背景如何?是否有非特异性条带出现?最好把内参和目的的图像一起拿出来看看
2楼2013-09-13 14:58:44
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zhangyoujian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
样品是不是同一个样品?条带没有出现是我们会重洗洗膜后再按孵一抗和二抗
3楼2013-09-14 08:57:25
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liushang1990

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangyoujian at 2013-09-14 08:57:25
样品是不是同一个样品?条带没有出现是我们会重洗洗膜后再按孵一抗和二抗

是同一个样品,怎么洗啊?TBST?
基督耶稣降世,为要拯救罪人。
4楼2013-09-14 09:39:07
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