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lily0423银虫 (小有名气)
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PCR产物弥散 扩不出来 怎么回事啊 求教 谢谢
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这是提取的土壤DNA进行PCR，是氨氧化细菌的功能基因 扩增出来为什么是一片白？右侧4个隐约可以看到目的基因 但是很淡！我的是 退火57度 30s，延伸 72度45秒 新图片.jpg |
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【答案】应助回帖
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1.在引物没有试验过，PCR条件没确定的情况下，建议用梯度PCR仪确定退火温度。 2.有阳性模板的情况下设立阳性对照。（成功的pCR结果，稀释1000倍就可以）建议每次都设立。 3.模板的问题。（和样品有关，有一定的可能） 4.引物设计和模板不匹配。因为引物可能是简并引物，特异性较差。或分离的菌株同标准菌株的序列有所差异。 5.极端的解决办法是胶回收PCR产物条带。以其为模板再扩增。然后测序。（实在没办法时，可以尝试） 或在PCR目的片段内再设计一段截短的片段，以PCR结果为模板做二次PCR |
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