| 查看: 1307 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
seasonin银虫 (小有名气)
|
[求助]
蛋白相互作用，钓取受体
|
||
|
我想用带his-tag的蛋白钓出细胞膜上的相应受体，也就是研究蛋白之间的相互作用，准备用his-pulldown，目前有纯化的蛋白，已经透析至水中，还有提好的细胞膜，细胞膜提取是用的生工的试剂盒，里面有DTT和蛋白酶抑制剂。 目前我有预装的纯化柱，我准备把纯化好的蛋白重新上NI柱，或者把柱子里的填料取出来（以便后面与膜蛋白孵育），我想应该是用buffer把填料处理，然后用纯化的蛋白与填料孵育，buffer洗几遍后离心收集珠子，然后在用细胞膜与柱子孵育，再用含有500mM咪唑的buffer洗几遍后离心收集珠子，最后用SDS-PAGE的上样buffer与珠子混合，煮沸离心取上清点样吧 目前有几个疑惑，希望能够得到指点 1.都说pulldown的假阳性高，那我该怎么设置对照呢？ 2.关于处理填料的buffer有没有什么参考呢？ 3.能不能提供一些实验中需要注意的细节呢？ 再次表示感谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
299求调剂
已经有6人回复
-
286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！
已经有5人回复
-
279求调剂
已经有3人回复
-
336求调剂
已经有3人回复
-
286求调剂
已经有3人回复
-
一志愿华中科技大学071000，求调剂
已经有3人回复
-
279分求调剂 一志愿211
已经有14人回复
-
332求调剂
已经有3人回复
-
0856材料专硕353求调剂
已经有3人回复
-
材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白质之间相互作用的研究方法有哪些？
已经有3人回复
- 纯化抗体的两个问题
已经有19人回复
- 圆二色谱对分析蛋白质相互作用有帮助吗
已经有5人回复
- 【求助】如何探究两个蛋白质之间的直接或间接相互作用？谢谢！
已经有6人回复
- 信号分子
已经有27人回复
- 求助--两个蛋白之间的相互作用的试验方法
已经有4人回复
- 如何验证RNA是否与蛋白质发生相互作用？
已经有8人回复
- 求蛋白质相互作用研究方法...
已经有12人回复
- 【求助/交流】请教高人：GST-pull down找出B蛋白和A蛋白相互作用，下游实验要怎么做啊
已经有4人回复
seasonin
银虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 809.7
- 散金: 10
- 帖子: 131
- 在线: 60小时
- 虫号: 894674
- 注册: 2009-11-05
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2013-11-25 13:55:56
starseacow
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +426 - BioEPI: 7
- 应助: 1217 (讲师)
- 金币: 9097.3
- 散金: 16445
- 红花: 226
- 帖子: 4669
- 在线: 2320.2小时
- 虫号: 1136974
- 注册: 2010-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
- 管辖: 动植物
2楼2013-09-09 21:42:57
seasonin
银虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 809.7
- 散金: 10
- 帖子: 131
- 在线: 60小时
- 虫号: 894674
- 注册: 2009-11-05
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2013-09-09 21:59:24
daniuda
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 295
- 帖子: 17
- 在线: 30.3小时
- 虫号: 1983216
- 注册: 2012-09-07
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
4楼2013-11-21 21:41:13
