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yinjuanchen

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 质谱分析蛋白质溶剂比例

Q1:如题,用质谱分析蛋白质,ESI源,在保证蛋白质不变性的前提下,有经验的前辈推荐下溶剂甲醇和水的比例。(我用1:1的比例,发生的严重的变性,只用水作溶剂,由于仪器本身的限制,电离电压最大为5500V,不能电离)
Q2:通过质谱图的电荷分布,为何可以知道溶液中蛋白质存在几种构象?(构象不同,所带电荷不同,但怎么区分不同的构象,谱图有什么特征?)
谢谢!

[ 来自小组 Ocean家族 ]
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闭关,写写写
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lzjessie_wlf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


yinjuanchen: 金币+1, 有帮助, 谢谢! 2013-09-26 08:08:58
Q2
简单来说,蛋白的构象越团簇,或者说缩成一团,那么它暴露在外面的可被质子化的个数 或者说戴电荷的个数会越少。
   越紧缩的构象,所带电荷越少,那么蛋白在m/z较大区域的分布信号就会越强。
   质谱图上,蛋白相关的多电荷峰会往m/z大的区域偏移。

加强酸denature后,m/z信号往小的区域偏移。

同一溶液中,蛋白同时存在几种构象,并且具体如何区分这几种构象,我就不太清楚了。
7楼2013-09-25 11:03:53
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chenzhengyi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yinjuanchen: 金币+1, 有帮助, 谢谢! 2013-09-06 19:50:29
你要加点甲酸,0.1%就可以了。你选的是正离子模式吧,还有你最好把仪器的类型说明清楚。至于用MS做蛋白质构象分析,我感觉不可能;你查阅相关文献了?你的蛋白分析是自上而下方法还是鸟枪法;一般而言蛋白分析是先酶解再分析的吧(自上而下,= =;有点混淆,反正就是有直接分析和酶解后再分析)
有阳光的地方就会有阴影
2楼2013-09-06 11:39:43
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yinjuanchen

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenzhengyi at 2013-09-06 11:39:43
你要加点甲酸,0.1%就可以了。你选的是正离子模式吧,还有你最好把仪器的类型说明清楚。至于用MS做蛋白质构象分析,我感觉不可能;你查阅相关文献了?你的蛋白分析是自上而下方法还是鸟枪法;一般而言蛋白分析是先酶 ...

谢谢你的回复!样品里面有缓冲溶液,所以没加酸。你的意思是不用加有机溶剂了吗?酶解,蛋白质就成多肽了,我要看蛋白质不是分析蛋白质结构。
闭关,写写写
3楼2013-09-06 19:48:22
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wx_55

铜虫 (小有名气)

关注

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2013-09-06 22:14:35
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