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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 质谱分析 » 质谱分析蛋白质溶剂比例
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yinjuanchen

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 质谱分析蛋白质溶剂比例

Q1：如题，用质谱分析蛋白质，ESI源，在保证蛋白质不变性的前提下，有经验的前辈推荐下溶剂甲醇和水的比例。（我用1:1的比例，发生的严重的变性，只用水作溶剂，由于仪器本身的限制，电离电压最大为5500V，不能电离）
Q2:通过质谱图的电荷分布，为何可以知道溶液中蛋白质存在几种构象？（构象不同，所带电荷不同，但怎么区分不同的构象，谱图有什么特征？）
谢谢！

[ 来自小组 Ocean家族 ]
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闭关，写写写
1楼 2013-09-05 21:02:58
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organicsuper

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

蛋白质，多肽作质谱的溶剂一般是水跟乙腈，再加0.1%的三氟乙酸。至于乙腈的用量跟样品的极性有关。样品电离后是否带多电荷是跟溶液的酸性有关，但是酸度过高会导致蛋白质析出。这个合适的溶剂要自己慢慢摸索。
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5楼2013-09-25 09:37:23
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chenzhengyi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yinjuanchen: 金币+1, ★有帮助, 谢谢！ 2013-09-06 19:50:29
你要加点甲酸，0.1%就可以了。你选的是正离子模式吧，还有你最好把仪器的类型说明清楚。至于用MS做蛋白质构象分析，我感觉不可能；你查阅相关文献了？你的蛋白分析是自上而下方法还是鸟枪法；一般而言蛋白分析是先酶解再分析的吧（自上而下，= =;有点混淆，反正就是有直接分析和酶解后再分析）
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有阳光的地方就会有阴影
2楼2013-09-06 11:39:43
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yinjuanchen

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenzhengyi at 2013-09-06 11:39:43
你要加点甲酸，0.1%就可以了。你选的是正离子模式吧，还有你最好把仪器的类型说明清楚。至于用MS做蛋白质构象分析，我感觉不可能；你查阅相关文献了？你的蛋白分析是自上而下方法还是鸟枪法；一般而言蛋白分析是先酶 ...

谢谢你的回复！样品里面有缓冲溶液，所以没加酸。你的意思是不用加有机溶剂了吗？酶解，蛋白质就成多肽了，我要看蛋白质不是分析蛋白质结构。
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闭关，写写写
3楼2013-09-06 19:48:22
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wx_55

铜虫 (小有名气)
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[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2013-09-06 22:14:35
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