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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急！500kD 蛋白western 求助
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yanshuai511

铜虫 (小有名气)

[求助] 急！500kD 蛋白western 求助

最近在做血浆中apoB的western，大小是520kD，浓缩胶5%，分离胶7% （150V，5h），感觉分的还可以，可转膜（350mA，5h）老是有问题。压出来的条带也不是很好看。有没有人做过的，求指导一下？
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1楼 2013-09-04 20:13:19
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
12楼: Originally posted by yanshuai511 at 2013-09-06 21:47:53
两块膜是什么意思，难道是一块胶上放两块摸？...

不好意思，录入时是想着组装成转膜夹子时，依次放上衬垫两层滤纸、电泳凝胶、NC膜、着两层滤纸、衬垫的顺序。。。当时正好被别人打断了一下，接着往下写就写错了。
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15楼2013-09-06 22:26:46
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yanshuai511

铜虫 (小有名气)
急啊，没人做过吗？
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2楼2013-09-04 22:00:25
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忽而今秋

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是转过了还是？做个预实验看看试试电压和时间。可以适当提高甲醇浓度。

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2013-09-05 00:12:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在转膜液里加SDS可以帮助大蛋白转膜。此外条带不好看可能是变性不完全造成的，大蛋白变性比较困难，可以适当延长变性时间。
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4楼2013-09-05 01:40:38
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