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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白过镍柱纯化，在用咪唑洗脱后需要做透析，透析怎么做？？？
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1066479423

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白过镍柱纯化，在用咪唑洗脱后需要做透析，透析怎么做？？？ 已有3人参与

现在有含有6个his标签的蛋白，用镍柱做纯化。在用咪唑洗脱后，需要做透析，我想问一下，透析应该怎么做呢？？？需要什么设备装置？？？希望哪位大神指导一下，越详细越好，在下非常感谢。
在一篇文中看到，在做完透析后，又过了一个poly(rI.rC)-agarose,不知道这个poly(rI.rC)-agarose是什么东西？？？它有什么作用呢？
谢谢

[ Last edited by 1066479423 on 2013-9-2 at 16:23 ]
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1楼 2013-09-02 16:22:52
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

pengpeng7196

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-04 21:15:18
我建议使用超滤浓缩管，不仅可以去除咪唑，还可以浓缩蛋白，一举两得，并且时间比透析来的快
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不断丰富自己
9楼2013-09-04 09:40:56
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-03 21:03:55
买个透析膜，用夹子夹住做成一个袋子，把你样品加在袋子里边，再把透析带架在烧杯里，烧杯你加你想置换的buffer
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
3楼2013-09-02 19:30:18
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RUI1990

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-03 21:04:17
gyesang: 回帖置顶 2013-09-03 21:04:27
是需要透析的，剪下合适长度的透析袋，蒸馏水低火煮10分钟，一端夹好，加入蛋白液，另一端也用夹子封好，放入盛有透析液的烧杯中。初始透析液不加入甘油，直接透析，后换加甘油的透析液，此时可加快速度，即使用磁力搅拌器。祝好运！
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做自己
5楼2013-09-03 09:48:18
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普通回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-02 18:29:24
不知道你做什么试验。不过咪唑洗脱一般不需要透析。如果细胞用尿素裂解，为了除去尿素做透析。不知道你做试验的目的是什么，如果只做些酶活试验，直接用就好了。
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Let'sdoit.
2楼2013-09-02 17:39:28
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因为吃饭

银虫 (小有名气)

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★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-03 21:04:03
烧杯、透析袋、夹子、磁力搅拌器，冰箱或者层析柜。一般透析24h以上。
烧杯里面加入透析缓冲液；透析袋在用之前煮下，然后一端用夹子固定，加入你要透析的样品，再用夹子封死两端，丢到烧杯即可。
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辩证。
4楼2013-09-03 08:49:21
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929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-03 21:04:39
看看生工生物的产品目录里面有透析设备，也有方法……
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想你没话说
6楼2013-09-03 15:33:51
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-03 21:04:45
透析简单的很，只需买个透析袋，透析袋截留分子量小于目的蛋白，然后袋子两端扎口，把蛋白装进袋子里，放进缓冲液中4度透析24小时，可以中间更换缓冲液
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自主创业者，捣腾生物试剂
7楼2013-09-03 20:21:32
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宁静2007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-04 21:15:11
一般都有现成的透析管在离心机中离心就行了，如果没有，也就只能透析了
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8楼2013-09-04 08:54:08
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yanfang2012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我用的也是超滤管，既能换液又能浓缩
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believe yourself！
10楼2013-10-07 22:11:19
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