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丁德军

新虫 (初入文坛)

[求助] 液相 流动相高盐 对色谱柱的影响

请教:在液相色谱中  是不是色谱柱越短,孔径越小  对流动相的变化越敏感。       原先是(C18  4.6*250    5um) 的柱子     换了UPLC后   是(C18   2.1*10   3.5um)的柱子   。方法转换后,梯度时发现在B相浓度最高的时候基线往上走。  在HPLC上没有此现象。


2:换了短的色谱柱后,色谱柱寿命实在太短了  300多针就不行了   出现严重拖尾现象,流动相中含有氯化钠    有影响吗  

3:流动相为高盐   含有磷酸盐    氯化钠等      用啥柱子好     
      样品分子量在6000左右,蛋白类
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zds316

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那种短柱子使用的时候,如果有缓冲盐,有机相比例高的话,很容易导致盐析的,柱子也会堵住的,柱压升高很多。
http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=3133586
6楼2013-08-30 10:59:56
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琉心净月

铜虫 (初入文坛)

你做完冲洗柱子的方法对不对呢?
2楼2013-08-29 09:33:43
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j115090587

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
会影响大一点的,更灵敏嘛
氯化钠是不是可以代替
可以考虑A,B都加点盐
做好以后多冲洗一下
3楼2013-08-29 17:09:59
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丁德军

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 琉心净月 at 2013-08-29 09:33:43
你做完冲洗柱子的方法对不对呢?

做完了都立即用5%甲醇水冲洗了色谱柱     不过我们做一次时间比较长  
  10个小时左右
4楼2013-08-29 21:34:28
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