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花雨sky

金虫 (小有名气)

[求助] ISSR-PCR筛选引物,为啥胶孔处会这么亮啊,而其他的就不会,这是怎么回事哇,急求

各位大侠,我这段时间在筛选ISSR引物,1-3、4-6、7-9是不同的引物,为啥1-3的胶孔会比较亮呢?PCR反应体系是2×Taq PCR MasterMix 12.5微升,引物(10umol/L)2微升,模板(10ng/uL)3.5微升,ddH2O补足25微升体系,我筛了十几个引物中只有几个是这样的,条带模糊是怎么回事?怎么解决呢?
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  • 2013-08-25 11:48:07, 1.71 M

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花雨sky

金虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by 石头雪儿 at 2013-08-25 14:57:00
图片看不到哦,ISSR-PCR进行PCR反应会不会是你提的DNA的模板纯度不够,含有太多杂质啊,如果含有很多糖或者蛋白的话,会在点样孔中出项很亮,建议在做ISSR前先测一下DNA的纯度

直接上图老是出错就上传了附件,能否下载下来帮我看看啊,谢谢了,因为是干茶,有一些降解,但不严重,跑电泳时胶孔也不亮,但是跑PCR同一模板不同引物有的胶孔亮有的不亮是为啥呢
3楼2013-08-25 16:15:26
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石头雪儿

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
图片看不到哦,ISSR-PCR进行PCR反应会不会是你提的DNA的模板纯度不够,含有太多杂质啊,如果含有很多糖或者蛋白的话,会在点样孔中出项很亮,建议在做ISSR前先测一下DNA的纯度
2楼2013-08-25 14:57:00
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