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花雨sky

金虫 (小有名气)

[求助] ISSR-PCR筛选引物，为啥胶孔处会这么亮啊，而其他的就不会，这是怎么回事哇，急求

各位大侠，我这段时间在筛选ISSR引物，1-3、4-6、7-9是不同的引物，为啥1-3的胶孔会比较亮呢？PCR反应体系是2×Taq PCR MasterMix 12.5微升，引物（10umol/L）2微升，模板（10ng/uL）3.5微升，ddH2O补足25微升体系，我筛了十几个引物中只有几个是这样的，条带模糊是怎么回事？怎么解决呢？
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    • 2013-08-25 11:48:07, 1.71 M

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1楼 2013-08-25 11:48:26
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石头雪儿

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
图片看不到哦，ISSR-PCR进行PCR反应会不会是你提的DNA的模板纯度不够，含有太多杂质啊，如果含有很多糖或者蛋白的话，会在点样孔中出项很亮，建议在做ISSR前先测一下DNA的纯度
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2楼2013-08-25 14:57:00
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花雨sky

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 石头雪儿 at 2013-08-25 14:57:00
图片看不到哦，ISSR-PCR进行PCR反应会不会是你提的DNA的模板纯度不够，含有太多杂质啊，如果含有很多糖或者蛋白的话，会在点样孔中出项很亮，建议在做ISSR前先测一下DNA的纯度

直接上图老是出错就上传了附件，能否下载下来帮我看看啊，谢谢了，因为是干茶，有一些降解，但不严重，跑电泳时胶孔也不亮，但是跑PCR同一模板不同引物有的胶孔亮有的不亮是为啥呢
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3楼2013-08-25 16:15:26
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