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fairytale527

[交流] 提质粒总有蛋白怎么办?

如题,我提质粒后跑电泳,电泳图的加样孔总有一点亮,应该是蛋白没有去干净吧.想问下,大家都怎么把蛋白除干净的

方法步骤:
加了溶液1,2,3之后,蛋白沉淀,离心5Min,12000rmp,上清液移入空EP管,加等量的酚氯仿(1:1),离心5min,12000rmp:上层移入新的EP管,再加无水乙醇等.
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reasonspare

木虫 (著名写手)

★
johnsooh(金币+1,VIP+0):thx, 一般酚氯仿(1:1)抽提可以出去蛋白, 为了效果好些,可以在溶液1加RNAase的同时加少量蛋白酶K可能效果会好一些,一些kit会用到,建议楼主试试.
如果你的样品里有蛋白,可以重复进行酚氯仿抽提一次,这样就会去处蛋白,

还有尽量不要在转移上清夜 时将 蛋白转入新管。否则再来一次。祝你好运
大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
2楼2007-11-14 23:26:58
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johnsooh

荣誉版主 (正式写手)

此用户来自小木虫总部信号不好

★
asr(金币+1,VIP+0):thanks,辛苦了.
一般酚氯仿(1:1)抽提可以出去蛋白, 为了效果好些,可以在溶液1加RNAase的同时加少量蛋白酶K可能效果会好一些,一些kit会用到,建议楼主试试.
___▂▂▃▄▅▆▇█无信号︻╋████�?
3楼2007-11-15 01:16:54
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随风而过

银虫 (小有名气)

你把酚氯仿换成酚/氯仿/异戊醇试试!
4楼2007-11-15 09:23:37
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hqhe

木虫 (正式写手)

★
johnsooh(金币+1,VIP+0):thx, 多谢分析
用EB染色的时候加样孔附近有些亮应该是少量的细菌基因组DNA吧?其实提质粒最好用公司的试剂盒,非常便宜且高效,30 min之内就搞定了
5楼2007-11-15 09:27:33
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genehsy

金虫 (小有名气)

★
asr(金币+1,VIP+0):thanks.
可以分三步抽提,先用苯酚抽提,看不到蛋白,再用酚仿混合液抽提,再用氯仿抽提,效果可能会好一些,另外进行SDS变性的时候一定要充分混匀。
6楼2007-11-15 19:28:21
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