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xiaoganghehe铜虫 (著名写手)
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[求助]
该怎么理解胞内酶和胞外酶？高速离心能让大肠杆菌细胞破裂吗？
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小虫是学材料的，最近在做关于大肠杆菌的实验，但对生物一窍不通，因此请教几个问题。 我的实验过程如下：在含乳糖的培养基中培养大肠杆菌，目的是诱导大肠杆菌产生β－半乳糖苷酶。随后离心（转速5000），用NaCl溶液清洗菌体，再离心（转速7000），然后用PBS溶液清洗菌体沉淀，得到菌体浊液。然后再往菌体浊液中加入ONPG，ONPG是β－半乳糖苷酶的底物。论文上说，对于大肠杆菌，β－半乳糖苷酶是胞内酶。但在离心分离之后，我往菌液中加入ONPG，溶液很快就变成黄色了。 所以很困惑：既然β－半乳糖苷酶是胞内酶，为什么ONPG很快就水解了呢？难道是β－半乳糖苷酶能被大肠杆菌很快释放到溶液中？或者离心能使大肠杆菌细胞破裂，β－半乳糖苷酶被释放出来？ 希望能听听高人的意见，能给出意见和建议最好！ |
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我想问一下，我是1ml上清液+100ulONPG，30℃反应了10min，然后加了0.4ml1M的碳酸钠终止反应，410测的吸光值。对照用的是将样品换成培养基。我的思路利用B半乳糖苷酶严格胞内，通过培养基中出现半乳糖苷酶作为指示，细胞膜有没有溶解。结果测出的吸光值都变负值了。是我用培养基校准不对吗 发自小木虫Android客户端 |
13楼2018-01-05 13:13:24
2楼2013-08-23 20:36:06
xiaoganghehe
铜虫 (著名写手)
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3楼2013-08-23 20:57:42
mizhoulong
木虫 (著名写手)
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4楼2013-08-26 08:40:53