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如何提高拟南芥原生质体转化的效率 已有1人参与
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最近做拟南芥原生质体转化，用的两个质粒（一个红色荧光，一个绿色荧光）来转化。效率很低，也有很多破裂。想请教各位： 1. 质粒提取的方法是Tape-Arabidopsis Sandwich，但是试剂配制等又有参考了J Sheen方法的。应该差别不大的吧。叶片状态不稳定，这个可能是关键，用的是弱光下的叶片，长得非常慢，起码要6周才能长到J Sheen说的四周大小。不知道这个影响大不大。 2. 转化后是放在光下的，16-24h都试过了，效率都没有很高。到底是在光下好还是黑暗呢，时间多久合适呢？ 3. 在激光共聚焦观察之前，转化体系都一直保持在六孔板里面，但是这样去检测的时候浓度就太稀了，找细胞都要找好久，不知道能不能离心一下放管子里？这样会不会导致细胞破裂啊？ 4. 我们的激光共聚焦是倒置的，我都盖盖玻片了，这个过程不会把细胞压破吧？我在观察的时候会看到有些细胞慢慢的在变形，刚看的时候还是圆的，很完整很漂亮，等到拍照完了叶绿体等都跑到一边去了，这是什么原因造成的呢，有办法解决吗？ |
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