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mckeil

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8
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在线: 3.5小时
虫号: 2570066
注册: 2013-07-28
专业: 法医物证学、法医人类学

[求助] 求助关于RT PCR 内参问的问题

我做2BS细胞的P16 mRNA 和 Bmi-1的表达情况  怎么选择内参基因
我在NCBI上查看β-actin这个内参出来好多人类的，，到底该用哪个  看不懂啊

谁能告诉下

还有  谁能帮我验证下引物设计的合理不合理能不能扩出来  赠送伊苏7PC版激活码1个本人玩通了。。。

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RT-PCR后的cDNA呢？已经有17人回复

1楼 2013-08-21 17:29:27

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xwchen24

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2013-08-22 00:03:47
mckeil: 金币+10, ★★★很有帮助, 嗯按照你说的我已经把引物设计好了不过blast 不会用呢我慢慢学一下的 2013-08-23 08:28:08

选realtime PCR 内参基因的引物，如beta-actin,一般是取自文献里面的，基本上所有的文献都会给出所有REAL-TIME PCR基因的引物，你blast一下后可直接使用；关于你的特异基因的引物设计，一般先查下文献，或者有网站收集这些realtime 引物的（人和小鼠的），确定没有的再自己设计引物，最好100-200bp吧，跨外显子和内含子为上，条带单一，其他无所谓吧。做realtime PCR之前一般都要用一般的PCR摸索一下反应条件以及引物的特异性。

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