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syya01木虫 (著名写手)
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[求助]
急：利用实时荧光定量PCR做内参基因筛选时，数据怎么分析
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| 我有6个内参基因，要筛选出表达最稳定的，利用2-deltaCt法做，这个2-deltaCt指的是什么呀？急急急！！！！ |
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2楼2013-08-28 17:17:17
【答案】应助回帖
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2013-09-26 09:25:39
gyesang: 回帖置顶 2013-09-26 09:25:42
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使用内标基因的目的是为了对加入到反转录反应中的 RNA 进行均一化处理。标准的看家基因一般都可被用作内标基因。适合于实时 PCR 反应内标基因包括 GAPDH ，β -actin, β 2 -microglobulin 以及 rRNA 。当然，其它的看家基因也同样能被用作内标。 参照因子的选择决定于基因表达定量实验的类型。最简单的设计就是把未经处理的样品作为参照因子（ calibrator ）。经内标基因均一化处理后，通过 方法计算，目标基因表达差异通过经过处理的样本相对于未经处理的样本的倍数来表示。对于未经处理的参照样，△△ C T ＝ 0 ，而 2 0 ＝ 1 。 所以根据定义，未处理样本的倍数变化为 1 。而对于那些经过处理的样本， 相对于参考因子基因表达的倍数为 。同样的分析也可用于不同时相的基因表达差异，在这种情况下，一般选 0 时刻的样本作为参照因子。 |
3楼2013-09-25 16:04:48