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lwzy888

金虫 (小有名气)

[求助] 提取总DNA出现RNA污染,会不会影响后续PCR及测序问题

我做细菌群落分析,在用试剂盒提取根瘤的总DNA的时候,发现底部有RNA污染,如果不除去RNA,会不会影响后续的16SrDNA的PCR以及建文库和测序什么的?谁能给点指示?
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  • 2013-08-17 16:53:40, 151.5 K

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oylb

禁言 (正式写手)

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5楼2013-08-17 19:02:31
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aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)

★ ★
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-08-17 21:08:15
不知道会不会对测序有影响,但是楼主你可以加RNase A (DNase free)来除去RNA,一般20ul的体系加1ul酶和4ul超纯水就够了,室温或者37度水浴半小时即可。不放心的话再跑一个胶看一下降解结果。
2楼2013-08-17 18:19:44
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lwzy888

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by aaa0001984 at 2013-08-17 18:19:44
不知道会不会对测序有影响,但是楼主你可以加RNase A (DNase free)来除去RNA,一般20ul的体系加1ul酶和4ul超纯水就够了,室温或者37度水浴半小时即可。不放心的话再跑一个胶看一下降解结果。

是提出来的DNA里面再加RNase A 酶吗?我提取的过程中按说明书加了的,然后室温静置了15分钟。
3楼2013-08-17 18:48:03
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oylb

禁言 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lwzy888: 金币+50, ★★★很有帮助, 非常感谢! 2013-08-17 20:51:22
本帖内容被屏蔽

4楼2013-08-17 18:59:30
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