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zgfxray金虫 (小有名气)
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PCR延长核苷酸序列
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| 想通过PCR在目的蛋白N端加8个氨基酸应该怎么操作？求帮助 |
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8*3=24,24+10=34，这个长度不算太长，而且跟你模板结合的实际上只有10，所以TM值只算那10个而已，你在设计引物下订单的时候说明这个情况，叫公司也计算那10个的TM值就行。 但是一般来说，10个碱基的引物TM值是不高的，跟你另一端引物配合起来的时候退火温度不好确定，所以你可以设计长一点，15或者20个25个都行，那么就是8*3=24,24+25=49，实际结合的引物长度为25。具体设计多长就看你的实际需要，要看看另一端取多少个碱基，特异性怎样，TM值先用vector nti来算，最好别太高，五十几六十度就行，最终可以设计得到实际跟模板结合约20个碱基的一对引物，注意，是实际结合而不是引物总长度。  图片1.jpg |
4楼2013-08-18 17:02:03
