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四季天123

新虫 (初入文坛)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳图加样孔好亮

RT-PCR产物，不知道为什么加样孔总是很亮，加样孔不亮的就没有条带，求解，很急
琼脂糖凝胶电泳图加样孔好亮


琼脂糖凝胶电泳图加样孔好亮-1
Administrator 2013-07-26 13hr 47min.jpg
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1楼 2013-07-26 17:42:12
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我在网上查了下，下面链接描述的状况跟楼主的很像，后面有很多分析和建议，希望有帮助
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/5351.html
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越学越无知
5楼2013-07-26 21:57:21
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maidi12

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
7楼2013-07-27 09:43:28
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普通回帖

xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-26 18:29:39
四季天123: 金币+2, ★有帮助 2013-07-27 14:00:59
加样孔亮一般是蛋白，比如colony PCR的时候就常出现，请检查你的RNA纯化
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越学越无知
2楼2013-07-26 17:55:36
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zhangbighui

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xz2001199802 at 2013-07-26 17:55:36
加样孔亮一般是蛋白，比如colony PCR的时候就常出现，请检查你的RNA纯化

有个疑问，凝胶电泳用的是EB染料，它只是嵌入到碱基对之前，也会结合到蛋白质上吗？
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成功，就是成为你想成为的人
3楼2013-07-26 20:58:18
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
嗯，这种情况应该是污染严重
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4楼2013-07-26 21:33:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangbighui at 2013-07-26 20:58:18
有个疑问，凝胶电泳用的是EB染料，它只是嵌入到碱基对之前，也会结合到蛋白质上吗？...

点样孔处一般是蛋白核酸复合物。EB染的是核酸，所以复合物也能看到。
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6楼2013-07-26 22:40:06
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四季天123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xz2001199802 at 2013-07-26 17:55:36
加样孔亮一般是蛋白，比如colony PCR的时候就常出现，请检查你的RNA纯化

那为什么上块胶，前三孔出现那样的条带，另外为什么下块胶孔里那么亮下面也跑出了目的条带。。
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8楼2013-07-27 14:02:53
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四季天123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by maidi12 at 2013-07-27 09:43:28
你照相之前把胶孔冲一下应该就没有这么亮了。

今天没有去实验室，不过一定会试一下的，非常感谢。。
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9楼2013-07-27 14:04:40
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四季天123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangbighui at 2013-07-26 20:58:18
有个疑问，凝胶电泳用的是EB染料，它只是嵌入到碱基对之前，也会结合到蛋白质上吗？...

溴乙锭等卤化物能影响细胞核中核小体的形成(与某些核小体蛋白质作用使其变性,不能生成正常的八聚体蛋白,从而影响DNA链的生成),影响DNA的正常复制,造成子代染色体损伤或缺失,使细胞发生染色体突变.同时 EB还能插入碱基对中，减少盘绕数，使DNA失活。
所以溴乙锭与蛋白是会发生作用的。上网查的，希望对你有帮助。。。
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10楼2013-07-27 14:06:22
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