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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 间接竞争ELISA中OD值测定结果有问题
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454277617

金虫 (小有名气)

[求助] 间接竞争ELISA中OD值测定结果有问题

用不同浓度的免疫原进行竞争，最后测定OD值时，发现结果比阳性对照还高，应该不是操作污染的问题。想知道还会有什么原因导致这种现象呢？
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1楼 2013-07-26 15:58:24
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 454277617 at 2013-07-29 17:13:47
嗯 ，好的。我觉得稀释加样和洗版应该没问题的。HRP的浓度不知道会有什么影响？是否是因为我包被浓度过高而抑制了反应呢？...

你做竞争之前没有做个棋盘滴定优化一个包被原浓度和一抗浓度吗？这个实验就可以解决包被原浓度和一抗的问题，先设计好方案再进行试验，避免走弯路，希望对你有用。
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Orbetterit,orenjoyit!
5楼2013-07-30 08:52:55
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changting

铜虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 鼓励积极交流发帖，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 13:54:16
这应该正常吧，有时候浓度高了，就会这样啊
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2楼2013-07-26 20:47:31
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做竞争ELISA的话，首先有没有梯度是关键，也就是竞争趋势，就是它是否随着你的竞争抗原的浓度增高而OD值有下降趋势呢，然后再关注阳性对照，至于它比你的阳性对照（没有加小分子的孔）值大，确实有点小问题，你可以找找自己稀释加样的问题、洗板的问题或者HRP的浓度问题等等，这些都可以通过一些对照试验解决的。
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Orbetterit,orenjoyit!
3楼2013-07-28 17:20:25
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454277617

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jfj_tj at 2013-07-28 17:20:25
做竞争ELISA的话，首先有没有梯度是关键，也就是竞争趋势，就是它是否随着你的竞争抗原的浓度增高而OD值有下降趋势呢，然后再关注阳性对照，至于它比你的阳性对照（没有加小分子的孔）值大，确实有点小问题，你可以 ...

嗯 ，好的。我觉得稀释加样和洗版应该没问题的。HRP的浓度不知道会有什么影响？是否是因为我包被浓度过高而抑制了反应呢？
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4楼2013-07-29 17:13:47
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