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PCR重复不出来
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| pcr做了几次，之前能P出来的，可是现在就是怎样都做不出来了，有时就算做出来条带也是非常的浅，只是为什么呢？12K左右的片段，是我的问题，还是这个确实是重复性不好？ |
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gyesang
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1949stone: 回帖置顶 2013-07-27 09:09:07
1949stone: 回帖置顶 2013-07-27 09:09:07
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长片段的DNA片段的确不太好扩增 1. 不知道楼主扩增12K这么长的片段，用的是什么模板，基因组DNA还是cDNA模板？模板的质量怎样？ 2. 扩增12K的长片段目的是什么呢，是鉴定还是构建表达载体？如果是构建表达载体，有没有考虑过分段扩增克隆呢，然后再把片段fusion起来 3. 可以换一些扩增能力比较强的可以扩长片段的Taq酶试试，比如GoTaq, LA-Taq, Primerstar 4. 可以优化一下体系，在PCR体系里面加一些反应增强剂比如可以加些DMSO至终浓度5% 希望对你有启发！ [ Last edited by gyesang on 2013-7-26 at 17:37 ] |
3楼2013-07-26 17:34:06
wangqi1107
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4楼2013-07-27 00:51:50
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5楼2013-07-27 09:09:17
40