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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 测细胞凋亡 增值~求助 没做过
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爱睡猪

金虫 (正式写手)

[求助] 测细胞凋亡 增值~求助 没做过

实验用不同的饲料喂实验体，最后要测肠道上皮细胞的凋亡和增值，两个月的投喂，就直接最后取样试剂盒就能搞定增值，细胞仪测凋亡么 ？来个思路啊  求助~
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ControlMyself
1楼 2013-07-25 16:00:41
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taojun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

还有几个细节提醒你一下啊，细胞量要多一点啊，吹打细胞的时候要轻，不要吹重，容易把细胞吹打成碎片，尤其是酒精固定之后，最好是固定一夜，还有就是细胞一定要吹散，不要有团，否则流式细胞仪检测的时候会出现假的结果。PBS和乙醇最好一直放在冰上。有什么问题你再联系我！
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3楼2013-07-26 11:15:55
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taojun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, good！ 2013-07-25 21:30:42
爱睡猪: 金币+30, ★★★很有帮助, 试剂盒就行啊 太好了 省事 感谢 2013-07-26 09:23:47
这是可以的啊，你只要看凋亡和增殖吗？我用过一个试剂盒细胞周期与凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)，步骤如下：
1. 自备试剂：
PBS；70%乙醇
2. 细胞样品准备：
a、 贴壁细胞：吸弃细胞培养液，胰酶消化吹打细胞，制备单细胞悬液，1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再一次1000g离心5分钟沉淀细胞。
b、 悬浮细胞：1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再一次1000g离心5分钟沉淀细胞。
c、 组织细胞：将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后，用0.25%的胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再一次1000g离心5分钟沉淀细胞。
3. 细胞固定：
细胞沉淀用1ml预冷的70%乙醇轻轻混匀，4℃固定2个小时以上或者过夜。接下来1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再次1000g离心5分钟沉淀细胞。
4. 染色：
碘化丙啶染色液配置：0.5 ml染色缓冲液中加入10 ul碘化丙啶储液和10ul RNase A，混匀待用。每个细胞样品加入0.5ml配置好的碘化丙啶染色液，轻轻混匀重悬细胞。37℃，避光温浴30分钟后，即可上流式细胞仪检测（5小时内完成为佳）。激发波长为488nm，检测红色荧光。
注意事项：
1. 操作碘化丙啶时，应注意防护，保护眼睛、避免吸入、并戴一次性手套。
2. 碘化丙啶存在淬灭现象，保存和使用过程中注意避光。
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2楼2013-07-25 16:31:20
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