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[求助]
求助——构建载体
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各位大虾。我想向pYES2(5.9kb)里插入一段1.5kb的基因。基因已经做了TA克隆。pYES2用hindIII和xba I酶切，基因用hind III和spe I酶切（xba I和spe I切出的片断互补） 胶回收用promega。回收浓度大约为20ng/ul。然后连接时，TAKARA的T4和ligation Mix,NEB的T4都试过。连接比例1：4，1：7，1：10都试过，就是不长啊。 有一次长出来几个，菌落PCR也P出条带了，但再提质粒时就什么都没。从那以后就一个菌落都没。 小弟都做了两个多月了，已经是厌学的情绪了。哪位大虾指点一下是哪的问题啊。 [ Last edited by 1949stone on 2013-7-23 at 10:27 ] |
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