应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 梯度PCR退火温度
52/1返回列表
查看: 2191  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

duke188

新虫 (初入文坛)

[求助] 梯度PCR退火温度

上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%)
Tm(1M Na+)：68.2
Tm(50mM Na+)：46.6
下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%)
Tm(1M Na+)：66.2
Tm(50mM Na+)：44.6
顺便问下大家，Tm(1M Na+)和Tm(50mM Na+)有什么区别啊?
我该选择哪个Tm啊？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2013-07-21 21:38:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

duke188

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xz2001199802 at 2013-07-22 22:46:16
应该有用，但是我之前我用的公司的合成引物没有这个信息，所以我也不知道你这个对退火温度的选择有什么作用

嗯，说明书上给的Tm不适合实验，不知道为什么

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
12楼2013-07-22 23:25:26
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

shangrila911

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
duke188(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-21 23:05:54
Tm(1M Na+)和Tm(50mM Na+)  括号里面的表示盐浓度，盐浓度越高，Tm越高，不过还是根据自己的实际PCR情况而定，一般PCR常用Tm(50mM Na+)作参考...
赞一下 回复此楼
一切都会好的!
2楼2013-07-21 22:01:11
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

duke188

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shangrila911 at 2013-07-21 22:01:11
Tm(1M Na+)和Tm(50mM Na+)  括号里面的表示盐浓度，盐浓度越高，Tm越高，不过还是根据自己的实际PCR情况而定，一般PCR常用Tm(50mM Na+)作参考...

我是新手，由于要做梯度PCR摸退火温度，按照Tm(50mM Na+)--5℃的话，退火温度是不是太低了
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-21 22:20:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-22 11:49:07
引用回帖:
3楼: Originally posted by duke188 at 2013-07-21 22:20:52
我是新手，由于要做梯度PCR摸退火温度，按照Tm(50mM Na+)--5℃的话，退火温度是不是太低了...

一般PCR时的退火温度很少选在50°C以下。从你的引物大概是20nt，GC含量在50%左右，退火温度一般在55-60°C。你可以根据这个设计你的温度梯度。
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-22 04:27:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭