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PCR
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亲们，最近在细胞中提取RNA,然后反转录，PCR，跑胶，遇到很多问题，想和各位大侠交流一下，不胜感激。 1.配置好的depc水泡过枪头后是不是就不能用了，是一次性的吗？ 2.直接用trizol加入到培养瓶中，感觉吹打半天，放置5分钟后显微镜下看细胞还是很多贴壁，是不是还要继续吹打啊，到底要什么细胞形态才是裂解好啊？ 3.pcr用的act作上引和下引，目的条带应该是哪个啊，我不太清楚？ 4.下面是我做的一些pcr电泳图，请大家帮我看看，是不是没结果啊？  谢谢，谢谢啊  55℃PCR.jpg  45℃PCR.jpg  IMG_20130712_205646.jpg  IMG_20130712_205711.jpg [ Last edited by 1949stone on 2013-7-22 at 16:37 ] |
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Sthunder
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
小瞎子(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-22 12:57:53
小瞎子: 金币+2, ★有帮助 2013-07-24 08:41:43
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小瞎子: 金币+2, ★有帮助 2013-07-24 08:41:43
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1.配置好的depc水泡过枪头后是不是就不能用了，是一次性的吗？ DEPC水可以重复使用哈！ 2.直接用trizol加入到培养瓶中，感觉吹打半天，放置5分钟后显微镜下看细胞还是很多贴壁，是不是还要继续吹打啊，到底要什么细胞形态才是裂解好啊？ trizol腐蚀性很强，加入后立即吹打（持续1 min足以），然后静止15 min，一般情况想你可以看到管子里没有明显组织。但这不重要，得到rna后跑个胶，看下带型就ok 3.pcr用的act作上引和下引，目的条带应该是哪个啊，我不太清楚？ act是常用的看家基因，但不知道你选用的引物具体设计在什么位点，一般我们都不扩全长。 4.下面是我做的一些pcr电泳图，请大家帮我看看，是不是没结果啊？ 明显的那两个带不知道是否是你的act，如果是的话，你的模板应该没有问题。但你选用的pcr退火温度蛮低，而且结果很弥散，根本没明带，所以建议拔高温度试试看。 good luck |
8楼2013-07-22 10:51:20
loveskyzhou
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2楼2013-07-19 10:48:18
3楼2013-07-19 10:56:16
loveskyzhou
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4楼2013-07-19 16:22:48
20