| 查看: 1613 | 回复: 19 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
PCR
|
|||
|
亲们，最近在细胞中提取RNA,然后反转录，PCR，跑胶，遇到很多问题，想和各位大侠交流一下，不胜感激。 1.配置好的depc水泡过枪头后是不是就不能用了，是一次性的吗？ 2.直接用trizol加入到培养瓶中，感觉吹打半天，放置5分钟后显微镜下看细胞还是很多贴壁，是不是还要继续吹打啊，到底要什么细胞形态才是裂解好啊？ 3.pcr用的act作上引和下引，目的条带应该是哪个啊，我不太清楚？ 4.下面是我做的一些pcr电泳图，请大家帮我看看，是不是没结果啊？  谢谢，谢谢啊  55℃PCR.jpg  45℃PCR.jpg  IMG_20130712_205646.jpg  IMG_20130712_205711.jpg [ Last edited by 1949stone on 2013-7-22 at 16:37 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 实验求助 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有80人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
孙启亮
金虫 (著名写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 121 (高中生)
- 贵宾: 0.216
- 金币: 2881.3
- 散金: 2546
- 红花: 23
- 沙发: 19
- 帖子: 2792
- 在线: 677.4小时
- 虫号: 1112263
- 注册: 2010-10-01
- 性别: GG
- 专业: 前寒武纪地质学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小瞎子(gyesang代发): 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-20 12:07:00
感谢参与，应助指数 +1
小瞎子(gyesang代发): 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-20 12:07:00
|
致楼主： 首先你的胶咋这样？溴化乙锭加多了吧 感觉你所有的引物都有问题，看引物浓度是不是太高才形成了那么多非特异扩增，若不是，建议重新设计引物。 楼主的操作应该不是很熟练，不知RNA质量如何，你说的trizol法提RNA不知所用试剂购自哪里，若是inviitrigen的，裂解时间较长，大约15min左右。 提取的RNA要有质量验证才能反转录定量。 无酶水被污染后就不能用了 第一个图中中间那条带有可能是目的条带，但跑的不太好，所以无法确定你的引物是否能用，确定目的条带的方法就是看marker了，将目的条带大小与marker对应。 祝楼主实验顺利 |
小瞎子6楼2013-07-20 11:03:06
loveskyzhou
铁虫 (正式写手)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 43.2
- 散金: 1025
- 红花: 4
- 帖子: 316
- 在线: 49.1小时
- 虫号: 1346820
- 注册: 2011-07-15
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤生物治疗
2楼2013-07-19 10:48:18
3楼2013-07-19 10:56:16
loveskyzhou
铁虫 (正式写手)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 43.2
- 散金: 1025
- 红花: 4
- 帖子: 316
- 在线: 49.1小时
- 虫号: 1346820
- 注册: 2011-07-15
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤生物治疗
4楼2013-07-19 16:22:48
投票:
30