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如何使大肠杆菌表达的时候不产生包涵体
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| 我在用大肠杆菌表达乙酰酯酶，但是表达出来后收集菌液超声波不能超开，分析可能是形成了包涵体，求助大神帮忙，如何才能表达出目的蛋白而不产生包涵体 |
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 分子生化实验经验积累 | 蛋白质生物学实验经验 |
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10楼2013-07-17 17:17:07
cicelyzh
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2楼2013-07-17 00:07:58
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-17 00:52:46
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| 防止包涵体出现常用的方法：1.降低重组菌的生长温度是防止包涵体出现最常用的方法。低生长温度降低了无活性的聚集体的形成的速率和疏水相互作用；细菌生长缓慢溶氧水平降低，也可以减少包涵体的形成。2.在培养重组菌时提供丰富的培养，创造最好的培养条件，如：供氧充足、合适的pH值等，以减少包涵体的形成。3.添加可促进重组蛋白质可溶性表达生长添加剂，增加细胞的渗透压。4.在低浓度的诱导剂条件下培养重组菌，减少重组蛋白质的表达量，也可减少包涵体的形成。5.利用硫氧还原蛋白融合表达或与目标蛋白质共表达，得到可溶性的蛋白质。6.筛选合适的宿主菌，使表达的重组蛋白质可溶。7.与目标蛋白质共表达某些能够在目标蛋白质折叠过程中起作用的分子伴侣，得到得到可溶性的蛋白质。 |
3楼2013-07-17 00:38:19
4楼2013-07-17 09:14:16