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无花草

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA电泳条带问题?

各位虫友大家好,小弟对RNA的电泳条带不怎么了解,请大家帮忙分析分析一下我的RNA电泳条带,图件附件,途中标的的A,B,C,D哪三个是28S,18S,5S。(苹果叶片总RNA,用试剂盒提取的)。还有从电泳图可知RNA降解情况怎么样?帮忙总结一下,对于RNA电泳条带,怎么分析?
RNA电泳条带问题?
2013-7-2.jpg 拷贝.jpg
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
无花草: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-07-15 15:08:21
gyesang: 金币+2, 鼓励应助交流! 2013-07-17 00:54:06
A: 28S B:18S  D:5S  (C为一些其他的RNA)
主要是因为上样量过多导致现在分开不明显的现象,建议减少上样量(可减少至1/3),即可跑出明显三条主带的RNA电泳图。
电泳条件:7-8V/cm,电泳20-30min,1.2-1.5%胶,新鲜配制电泳缓冲液。
伟大航线....
3楼2013-07-15 11:54:17
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longrna

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hyphen007 at 2013-07-15 12:00:00
如果A28 B18的话,咋看着不像2:1啊,?

点样量太多影响亮度比。
平时没事拿些无用的RNA点个梯度一跑即可发现上样量多的时候跑出来就长这个样子。A就是28S
伟大航线....
6楼2013-07-15 16:28:51
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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无花草: 金币+3, 有帮助 2013-07-15 15:08:38
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-17 00:53:52
从植物叶片里提RNA会有更多的带,因为叶片里含有大量叶绿体,所以不仅有真核生物的28S,18S, 5S,还有原核属性的23S, 16S, 5S。在没有marker的情况下,具体你的条带对应什么不是很好说。看rRNA完整情况主要是看28S/18S,如果果亮度大致为2:1,说明RNA的完整性好.
2楼2013-07-15 11:42:20
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
无花草: 金币+1 2013-07-15 15:08:56
如果A28 B18的话,咋看着不像2:1啊,?
4楼2013-07-15 12:00:00
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


无花草: 金币+1 2013-07-15 15:09:01
marker呢?没有marker不好说,也许B28,C18?不懂,瞎说的,见谅啊
5楼2013-07-15 12:01:16
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grape_vine

金虫 (小有名气)

没有marker还是不行,用dl2000,结果可能就清晰很多,这个图,大家还不好下结论说谁是谁.
7楼2013-07-15 22:10:37
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hardytam

铁虫 (初入文坛)

减少上样量,再试下,28s比18s亮1.5倍以上,证明RNA 比较好。
8楼2013-07-16 11:53:18
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无花草

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by longrna at 2013-07-15 16:28:51
点样量太多影响亮度比。
平时没事拿些无用的RNA点个梯度一跑即可发现上样量多的时候跑出来就长这个样子。A就是28S...

嗯,什么时候试试!谢谢!
好好做实验,毕业找份好工作!
9楼2013-07-16 18:02:08
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shucanwei

木虫 (正式写手)

按我的经验,估计不行!
唯以一人治天下,不以天下奉一人。
10楼2013-07-17 00:19:44
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