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何超

金虫 (正式写手)

[交流] HPLC交流

本人在做液相的时候遇到了一个很奇怪的现象，现描述如下：
1，第一次做的时候，标准品在在线实时界面明明显示的是一个峰，在离线数据里查看的时候居然出现了两个连着的峰，不过前面那峰很小，分离度也还行，算是完全分开了，别人的解释是标准品不稳定很容易分解，但我在实时分析里面明明看到的是一个峰啊~~~~~~
2，第二次做同一个样品，用标准品做线性的时候，进样量大于10 ul 标准品峰就分裂成两个，但是是双峰骆驼的肩峰，没有分离度可言，两个峰面积的和也正好成比例；而样品里该物质的浓度是标准品的3倍左右，进样量同是10 ul （相当于标准品进样量30 ul），图谱显示一个峰，并没有分裂成两个峰。
3，标准品是咖啡酸，药典的方法，觉得方法应该是没有问题的，想问一下如果是柱子的问题会不会出现这种情况。
盼大家积极回复，小女子有礼啦~~~~~~
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1楼 2013-07-14 11:27:28
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何超

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by fuliu222 at 2013-07-14 16:34:51
明显是超载

如果是简单的超载的话，样品怎么解释呢？
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9楼2013-07-14 17:02:55
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只要心够决

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xiaoxiao270: 金币+2 2013-07-14 13:07:11
何超: 金币+2, 谢谢参与 2013-07-14 16:55:33
同一个样品应该不会是样品分解了  如果样品没问题的话  估计柱子扛不住了 LZ不妨换一根柱子试试
如果色谱柱坏了，反相柱，只要不是认为摔的缘故，坏的原因主要是柱头脏了。解决这个问题的方法：用30%异丙醇甲醇低流速冲洗过夜，冲洗完后用纯甲醇低流速顶替一天再上水相，PS： LZ还是换个柱子试试吧~
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2楼2013-07-14 13:02:43
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wangkaibo123

荣誉版主 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
何超: 金币+2, 谢谢参与 2013-07-14 16:40:09
1  在线时一个峰 在解析两个 可能是在线时210波长 解析时254 波长不一样，峰行不一样，你核对下

2  样品浓时出现肩峰是很正常的 ，与柱子的承载能力有关 只要进样少时是一个峰就可以了 肯定是一个化合物
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3楼2013-07-14 13:55:14
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何超

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 只要心够决 at 2013-07-14 13:02:43
同一个样品应该不会是样品分解了  如果样品没问题的话  估计柱子扛不住了 LZ不妨换一根柱子试试
如果色谱柱坏了，反相柱，只要不是认为摔的缘故，坏的原因主要是柱头脏了。解决这个问题的方法：用30%异丙醇甲醇低流 ...

之前我也怀疑是柱子的载样量的问题，但是我用同一根柱子进了样品的，根据峰面积显示浓度是标准品的3倍，进样量也是10 ul ，样品显示也是一个峰，我直接用标准品进30 ul 还是双驼肩峰，都不知道怎么回事。
话又说回来，方法是药典的方法，应该是经过方法学考察的，线性范围应该也是比较宽的吧......
谢谢参与哦......
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4楼2013-07-14 16:23:00
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