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何超

金虫 (正式写手)

[交流] HPLC交流

本人在做液相的时候遇到了一个很奇怪的现象，现描述如下：
1，第一次做的时候，标准品在在线实时界面明明显示的是一个峰，在离线数据里查看的时候居然出现了两个连着的峰，不过前面那峰很小，分离度也还行，算是完全分开了，别人的解释是标准品不稳定很容易分解，但我在实时分析里面明明看到的是一个峰啊~~~~~~
2，第二次做同一个样品，用标准品做线性的时候，进样量大于10 ul 标准品峰就分裂成两个，但是是双峰骆驼的肩峰，没有分离度可言，两个峰面积的和也正好成比例；而样品里该物质的浓度是标准品的3倍左右，进样量同是10 ul （相当于标准品进样量30 ul），图谱显示一个峰，并没有分裂成两个峰。
3，标准品是咖啡酸，药典的方法，觉得方法应该是没有问题的，想问一下如果是柱子的问题会不会出现这种情况。
盼大家积极回复，小女子有礼啦~~~~~~
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1楼 2013-07-14 11:27:28
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何超

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by JinyHuang at 2013-07-14 16:47:40
针对第一个问题，如果你那时候再走多一针估计样品也会像离线数据显示的那样，估计是第一针的时候整个色谱系统还没走好。
针对第二个问题，我可以很确定地告诉你超载了，我做过一个10-HDA的实验，样品都稀释到2500倍 ...

第一个问题可能是我没说清楚，我走第二针标准品的时候在线也是一个峰，离线两个。但是用后面的大峰计算样品中该物质的含量与后面的只有一个峰的差不多......我就是觉得这种现象很诡异
对于第二个问题，我已经说了很多遍了，如果是过载，样品的峰没有分解啊......
我进10 ul 是没有问题的，超过10就不行了（试过相当于12.5ul的），我要做方法学验证，所以要进样量大一点的
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8楼2013-07-14 17:01:47
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只要心够决

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xiaoxiao270: 金币+2 2013-07-14 13:07:11
何超: 金币+2, 谢谢参与 2013-07-14 16:55:33
同一个样品应该不会是样品分解了  如果样品没问题的话  估计柱子扛不住了 LZ不妨换一根柱子试试
如果色谱柱坏了，反相柱，只要不是认为摔的缘故，坏的原因主要是柱头脏了。解决这个问题的方法：用30%异丙醇甲醇低流速冲洗过夜，冲洗完后用纯甲醇低流速顶替一天再上水相，PS： LZ还是换个柱子试试吧~
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2楼2013-07-14 13:02:43
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wangkaibo123

荣誉版主 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
何超: 金币+2, 谢谢参与 2013-07-14 16:40:09
1  在线时一个峰 在解析两个 可能是在线时210波长 解析时254 波长不一样，峰行不一样，你核对下

2  样品浓时出现肩峰是很正常的 ，与柱子的承载能力有关 只要进样少时是一个峰就可以了 肯定是一个化合物
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3楼2013-07-14 13:55:14
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何超

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 只要心够决 at 2013-07-14 13:02:43
同一个样品应该不会是样品分解了  如果样品没问题的话  估计柱子扛不住了 LZ不妨换一根柱子试试
如果色谱柱坏了，反相柱，只要不是认为摔的缘故，坏的原因主要是柱头脏了。解决这个问题的方法：用30%异丙醇甲醇低流 ...

之前我也怀疑是柱子的载样量的问题，但是我用同一根柱子进了样品的，根据峰面积显示浓度是标准品的3倍，进样量也是10 ul ，样品显示也是一个峰，我直接用标准品进30 ul 还是双驼肩峰，都不知道怎么回事。
话又说回来，方法是药典的方法，应该是经过方法学考察的，线性范围应该也是比较宽的吧......
谢谢参与哦......
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4楼2013-07-14 16:23:00
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