应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR实验结果与酶用量有关吗？
201/2返回列表12下一页
查看: 2691  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

windycui

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] PCR实验结果与酶用量有关吗？ 已有9人参与

不知道大家有没有遇到过这样的情况，我用的是宝生物的普通Taq酶，25微升体系，按照50微升体系减半后扩增出很浅的条带，只把酶用量加倍后无条带，但是引物二聚体比以前亮多了，PCR结果跟酶用量有关吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-12 16:45:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2013-07-13 23:44:57
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
普通回帖

肃清华书

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 正解！ 2013-07-14 14:52:28
酶加多了以后会导致非特异性扩增增多，所以一般加1U的酶就够用了
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-14 08:50:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ml1294

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
应该是没关系， 退火温度 循环数调整一下 或是模板
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-14 08:58:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

figmeiling

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-14 14:52:41
25ul的体系只需要1ul的酶，加多了也无用。但PCR结果与退火温度与模板有很大的关系。尤其是退火温度要找准，不然就扩增不出所需要的目的条带。
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-14 14:25:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qzaqz

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-15 20:18:43
我用的也是宝生物的普通酶，之前也是减半做PCR，扩不出来，后来咨询了他们的技术员，他们告诉我不论做多大体系，都用1U的酶，其它的按比例加。同时预变性时间不用5min，2分就可以。后来就再没出现扩不出来的情况了
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-14 14:52:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-07-14 08:50:53
酶加多了以后会导致非特异性扩增增多，所以一般加1U的酶就够用了

可是安装你这个说法，一开始我加的酶不够1u，有条带，后来加的比1u多了，就没有条带了
赞一下 回复此楼
7楼2013-07-15 08:25:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by basler at 2013-07-13 23:44:57
我不知道你为什么还要加倍，酶在反应体系中本来就是足量或过量的！

因为领导有要求
回复此楼
8楼2013-07-15 08:25:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windycui

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by qzaqz at 2013-07-14 14:52:19
我用的也是宝生物的普通酶，之前也是减半做PCR，扩不出来，后来咨询了他们的技术员，他们告诉我不论做多大体系，都用1U的酶，其它的按比例加。同时预变性时间不用5min，2分就可以。后来就再没出现扩不出来的情况了

我一开始加的酶不足1u，有条带，加了1u多了，就没有条带了，都是引物二聚体了
赞一下 回复此楼
9楼2013-07-15 08:26:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qzaqz

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
扩增片段多长？如果较长要增加dNTP的量,不过一般的都适合。 退火温度调低再试下，或做个温度梯度
赞一下 回复此楼
10楼2013-07-15 12:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 windycui 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-29 18:04 by 4FFAWE8HcgUD
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 17:31 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 14:03 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 11:18 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +3 349506619 2026-08-28 3/150 2026-08-29 10:49 by 木风9012
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭