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[求助]
蛋白表达
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| 本人最近表达一个大小约600bp的原核基因（不连标签的话大小应该在25kd左右）（经测序完全正确），载体为pet32a+,表达菌为BL-21，经摸索不同温度及诱导剂浓度，跑SDS-PAGE发现在贴近25KD处有两处很浓的条带（考马斯亮蓝染色），但是经计算目的蛋白加上蛋白标签应该在45KD左右，于是做了个WESTERN-blot,一抗为鼠抗HIS标签，二抗为羊抗鼠辣根过氧化物酶，结果发现位于MARKER，25KD下方有较浓条带，位于25KD上没有条带反应。我推测是表达的目的蛋白（25KD上方）与标签蛋白分离（25KD下方的较浓条带为标签蛋白），没有连上，有这个可能性吗？还是表达时发生读码框错误表达的是一个异常蛋白？我应该如何处理？重新摸条件表达吗？ |
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3楼2013-07-15 09:38:13
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
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- 专业: 生物化学
2楼2013-07-12 00:02:14