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still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-12 17:15:52
1、跑个电泳，确定模板没问题
2、根据自身的实验，确定扩增循环参数，文献作为参考，以自己的为准。
3、确定体系里的每一种成分都没坏（当然，这种情况极少）
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有时一本正经，有时胡言乱语。
21楼2013-07-12 15:47:49
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
20楼: Originally posted by sycr at 2013-07-12 15:29:19
哦，这个问题没有仔细的想过，我是新手，请问循环数对PCR的影响也很大吗？...

你现在不是看到不到东西吗? 除了大家说的那些原因,循环数对你用的那个32的可能影响不大,但是有可能28的那个你用了35就可以看到了.所以做不出来的时候,可以斗勇35,等做出来了,再减循环数也行.更多的循环会增加扩增量,但是也会引入更多的错配.
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22楼2013-07-12 16:20:15
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sycr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-12 16:20:15
你现在不是看到不到东西吗? 除了大家说的那些原因,循环数对你用的那个32的可能影响不大,但是有可能28的那个你用了35就可以看到了.所以做不出来的时候,可以斗勇35,等做出来了,再减循环数也行.更多的循环会增加扩增量 ...

哦，十分感谢，我再去试试。
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23楼2013-07-12 16:22:28
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sungel

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
时间长了吧  有时候要看你的链子长度，摸索时间和温度的，你再试试吧！
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24楼2013-07-12 17:12:49
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figmeiling

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-14 16:10:08
1.查看模板DNA;
2.设计一个梯度PCR，检测引物的最佳退火温度；
3.试用下pfu-mix；
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25楼2013-07-14 14:19:12
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menghuaqing

金虫 (小有名气)
反应程序一般都问题不大，建议你重点检查你的模板的质量和引物的匹配性，如果是用的通用引物，建议更换成专一引物
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26楼2013-07-19 10:09:02
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hyphen007

金虫 (小有名气)
PCR就是这么诡异
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27楼2013-07-19 10:50:36
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