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western blot伯乐电泳仪的问题请教！谢谢大家！
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| 本人是WB新手，想请教大家一个问题。最近做的两次WB电泳时都电泳了1H左右但是连MARKER都没有跑出孔道。第一次预跑时是正常的，结果吃了个饭回来就屏幕上出现了E1的错误，查说明书说可能是电路的问题或是BUFFER的问题。今天重配了BUFFER,胶也新做的，没有出现E1错误。但是等了1H了，MARKER还是连孔道都没有跑出。之前在别人实验室用的电泳仪做的都很好（都是旧的），现在新换了一个实验室，买的是伯乐的电泳仪及电泳槽（都是新的）。这两周做BDNF蛋白，浓缩胶是15%的，分离胶是5%的，RUNNING BUFFER是新配的，电泳槽中间的BUFFER也没过梳子齿的胶了（保证内外是闭合的）。跑胶用的是浓缩胶恒压60。值得注意的是，我今天预跑时感觉里面有上升的小气泡，但是点样完正式跑时就觉得里面的上升的气泡变少了。我担心是胶的浓度高了（以前我们老师用的12%的浓缩胶，不过BDNF的分子量也在15%的范围）就等了1H，结果还是没有变化，就看了下电流。结果发现电流很小，就5左右（以前用过别人实验室的伯乐做转膜没有这种情况，恒压80的话，电流就10几）。关掉电泳仪后重新试，先设恒流20，结果START后它又自动跳成恒压了。然后恒流还是很小。到底是什么原因啊？下周老板就要结果了，现在还没做出来，很急！谢谢大家帮忙解答！ |
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cicelyzh
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