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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 氧化亚铁硫杆菌固体培养长不出菌落
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hecongren

新虫 (小有名气)

[交流] 氧化亚铁硫杆菌固体培养长不出菌落 已有4人参与

从矿坑水里，用9K液体培养基富集培养，氧化活性很强。
      但是富集后取0.1mL转接到固体培养基上怎么就长不出菌落了呢？
       琼脂条、琼脂粉、琼脂糖都试了，用量也试了0.7%、1%、1.5%几种，但是都失败了。
       恳求各位虫姐虫哥指点。（小弟新手没悬赏，见谅）
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自己选择的路，就是粉身碎骨也要走完
1楼 2013-07-09 10:14:24
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)
★
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楼主用的是哪个配方的固体平板？最好看看近几年发表的相关文章参考一下。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-07-10 14:03:01
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hecongren

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanghuiyanyx at 2013-07-10 14:03:01
楼主用的是哪个配方的固体平板？最好看看近几年发表的相关文章参考一下。

看过很多文献，如文献中所述，采用就是9K液体培养基的配方，(NH4)2SO4 3.0, K2HPO4 0.5, KCl 0.1, MgSO4.7H2O 0.5, Ca(NO3)2 0.01加入琼脂。配了无数次平板，只有一次用琼脂粉时，长出了几个菌落，可是接着转接就又不长了。
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自己选择的路，就是粉身碎骨也要走完
3楼2013-07-10 14:50:59
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henshui005

新虫 (初入文坛)
★
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9K 培养基(g) ：(NH4)2SO4 3, KCl 0.1, K2HPO4 0.5,
MgSO4⋅7H2O 0.5, Ca(NO3)2 0.01. 蒸馏水700 mL. pH
3.0，121℃灭菌15 min，加入300 mL 预先配成14.78%
的FeSO4⋅7H2O 溶液并过滤除菌。
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4楼2013-07-10 15:22:42
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hecongren

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by henshui005 at 2013-07-10 15:22:42
9K 培养基(g) ：(NH4)2SO4 3, KCl 0.1, K2HPO4 0.5,
MgSO4⋅7H2O 0.5, Ca(NO3)2 0.01. 蒸馏水700 mL. pH
3.0，121℃灭菌15 min，加入300 mL 预先配成14.78%
的FeSO4⋅7H2O 溶液并过滤除菌。

9k液体培养基跟你说的一样，没有问题，关键就是9k固体不长。
固体培养基如下：9k盐溶液400mL+亚铁（44.2或者20g/L都试了）300mL+1g琼脂（琼脂粉、琼脂糖、琼脂条都试了）300mL。pH3.0。
接种0.1mL菌悬浮液，还是不长。
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自己选择的路，就是粉身碎骨也要走完
5楼2013-07-10 15:48:44
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henshui005

新虫 (初入文坛)
★
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你培养时间是多长啊？
文献上的：在9K 固体培养基上7~10 d 出现圆形凸起状小菌落(直径约1 mm)，将单独小菌落挑起，接种到装有
5 mL 液体培养基的小锥形瓶(或试管)中，以棉球封口，直到小锥形瓶的液体颜色也变成红棕色.重复在液体培养基中扩大培养和在平板上反复分离，最后分离出优良菌株。
铁离子的浓度你要不试试文献的：Fe2+浓度为9 g/L 时平板上细菌的生长效果不佳，菌落数很少，而Fe2+浓度为4.5 g/L 时较利于平板上菌落的生成.
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hecongren
6楼2013-07-10 16:23:15
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hecongren

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by henshui005 at 2013-07-10 16:23:15
你培养时间是多长啊？
文献上的：在9K 固体培养基上7~10 d 出现圆形凸起状小菌落(直径约1 mm)，将单独小菌落挑起，接种到装有
5 mL 液体培养基的小锥形瓶(或试管)中，以棉球封口，直到小锥形瓶的液体颜色也变成红 ...

配制了很多次平板培养基，仅有一次在平板上长出了黄褐色菌落，长出菌落那一次也是12d左右吧。挑出菌落接种5mL9K液体，活性很好，但再次涂布于固体上又不长了，此后，培养多次平板都没长出菌落。
     如你所说，已经把Fe2+浓度降低至4.5g/L了。但还是长不出菌落。
    分离纯化的工作一直停滞不前，郁闷啊。都博二了！
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自己选择的路，就是粉身碎骨也要走完
7楼2013-07-10 16:43:04
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Freedomqqc

铁虫 (小有名气)
★
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现在我是分离酸性矿物废水中自养型和异养型细菌。。。但是富集培养异养型细菌时，并划线分离出现大量霉菌。没有目的微生物产生。。求指导！老师让我一个月完成，我这都用了三个月了，还是一无所获
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科研不易，希望自己能够坚持
8楼2014-02-19 17:02:11
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ciceyh

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by henshui005 at 2013-07-10 16:23:15
你培养时间是多长啊？
文献上的：在9K 固体培养基上7~10 d 出现圆形凸起状小菌落(直径约1 mm)，将单独小菌落挑起，接种到装有
5 mL 液体培养基的小锥形瓶(或试管)中，以棉球封口，直到小锥形瓶的液体颜色也变成红 ...

就改变铁离子浓度吗？其他都不变？
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9楼2014-05-26 19:29:05
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