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新虫 (初入文坛)

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[求助] 做病毒检测，PCR跑胶500bp处总是有条带

我做病毒检测，本来目的条带是在200左右才对，但是琼脂糖凝胶电泳后500bp的地方总是有条带，重复N遍了，而且检测的不是一种病毒，图上这些孔一共检测了3种病毒，但是很诡异的500bp的地方总是有条带，而且加样越多条带越亮。PCR体系是25微升的，CDNA2微，引物正反向各0.5微，extaq0.2微，10倍buffer2.5微，dNTp2微，dd水17.3，之前一直用这个体系，都没问题，但是最近总是出这种问题。希望诸位高手给解释下。

433-Gel 2013-07-04 20hr 22min.jpg

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1楼2013-07-04 20:43:22

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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

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【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-04 22:23:22
641306250: 金币+3, ★有帮助 2013-07-05 20:27:21

非特异扩增。建议：稀释模版。也就是模板少加点。稍微提高退火温度试试，减少非特异扩增。还有就是会不会是污染，引物，水，或者模板。，可以设置对照做一下

祝顺利