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ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] 克隆表达 引物设计

急急急  现在我知道某基因的全长 要扩增全长 引物怎么设计啊  网上有这样说的:


1、从你的全长基因的正义链直接数出16-20个碱基(从ATG开始),然后在它的5‘端加上游酶切位点,如果需要的话加上保护碱基。
2、从你的全长基因的反义链从5’-3‘端直接数出16-20个碱基,后在它的5‘端加上游酶切位点,如果需要的话加上保护碱基。
这样引物就设计好了。
注意:上下游的酶切位点不要设计反了。



难道不用软件分析吗

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-5 at 09:46 ]
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ljj0720

银虫 (正式写手)

引用回帖:
26楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-07-07 08:01:22
ATG上游和TAA下游的序列还有吗?最好全给我!...

嗯 刚刚看见  谢谢
ORIGIN      
        1 tttatccaaa aaatttttaa ttgttttggc ttttgcgggg gattctacga taataaggtg
       61 cttcattgaa cgcctttaat aaaatgttta tacctattaa tgaatgattg tagcatagaa
      121 ttttgactaa acgattcatt aaaccataaa aactataacg gcgctaaaaa tcaaagagtt
      181 ggaacaccct ttgcttgact aacagcaaat atctatgcaa aggatgcaaa catgagtttt
      241 aggataaata ccaatatcgc cgctttaact tctcatgcgg taggggttca aaacaacaga
      301 gacctttcaa gctcgcttga aaagttaagc tcagggctta ggatcaataa agccgctgac
      361 gattctagtg ggatggcgat cgctgatagc ttaaggagtc aaagcgcgaa tttgggtcaa
      421 gcgatccgca acgctaatga cgctattggt atggttcaaa ccgcagataa agcgatggat
      481 gagcaaatca aaatcttaga caccattaaa accaaagccg ttcaagccgc tcaagacggg
      541 caaactttag aaagccgaag agccctccag agcgatattc aaaggttgtt agaagaacta
      601 gacaatatcg ctaacaccac aagctttaac ggccaacaaa tgctttcagg aagtttttct
      661 aacaaagaat ttcaaattgg cgcgtattct aacaccacgg ttaaggcgtc tattggctca
      721 acgagctcag ataagattgg gcatgtgcgc atggaaactt cttcttttag cggtgcaggc
      781 atgctcgcta gcgcagcggc gcaaaacttg actgaagtgg gattgaattt caaacaagtc
      841 aatggcgtga acgattataa gattgaaacc gtgcgcattt ctacgagtgc tggcactggg
      901 attggagcgt taagcgaaat catcaaccgc ttttctaaca ccttaggcgt tagggcctct
      961 tataatgtca tggccaccgg tggcactccc gtgcaatcag gaactgttag ggagctcacc
     1021 attaatggcg tagaaattgg gaccgtgaat gatgtgcata aaaacgacgc tgacgggagg
     1081 ttgactaacg ccattaactc cgtcaaagat cgcaccggcg tggaagcgag cttggatatt
     1141 caagggcgca ttaatttgca ctccattgac gggcgcgcga tttctgtgca tgcagcgagc
     1201 gcgagcggtc aggtttttgg gggagggaat tttgcaggga tttctgggac acagcatgcg
     1261 gttattgggc gcttaacctt gactaggacc gacgctagag acatcattgt aagcggtgtg
     1321 aattttagcc atgtgggctt tcattccgct caaggggtgg cagaatacac cgtgaatttg
     1381 agagcggtta ggggtatttt tgatgcgaat gtggcttcag cagccggagc gaacgctaat
     1441 ggcgcgcaag cggagaccaa ttctcaaggt ataggggctg gggtaacaag ccttaaaggg
     1501 gcgatgattg tgatggatat ggcggattca gcgcgcacgc aattagacaa gatccgctcg
     1561 gatatgggtt cggtgcaaat ggaattggtt acaaccatta ataatatttc tgtaacccaa
     1621 gtgaatgtta aagcggctga atctcaaatc agagatgtgg attttgctga agagagcgca
     1681 aacttttcta aatacaatat tttggcgcaa agcgggagtt ttgctatggc gcaagcgaat
     1741 gcggtgcaac aaaatgtctt aaggctttta caataacagc ccttttaatt caaaggggcg
     1801 ttagcccttt ttataagtta gaacgatgga tatttatcaa aaaaacttgc aagctctttt
     1861 caaaaaagac cctcttttgt tcgcaaagct caaagccatt aaagaaaaca aaaaatacga
     1921 agtgttttta gggaatgata gcgcgaattt caacctctta gataaagaaa caaacacgcc
     1981 cttatttgaa aaaagcccgc tagattcaa
这是原基因 谢谢 您
28楼2013-07-08 15:57:52
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bleach060452

新虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
能不用软件么,开玩笑~~
岂能尽如人意,但求无愧我心
2楼2013-07-04 15:51:26
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bleach060452

新虫 (小有名气)

他只是极其简单的一说,复杂的地方一点没提,优化才是最恶心的~~必须有软件辅助的
岂能尽如人意,但求无愧我心
3楼2013-07-04 15:56:31
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refreshing11

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-04 17:02:15
分析的余地比较小,因为你的序列已经固定,两端的序列都要扩增出来,没法选择了,不过如果不得已,可以考虑简并引物的使用。希望有帮助

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-07-04 15:56:37
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