24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 333.8
散金: 427
红花: 3
帖子: 506
在线: 71.8小时
虫号: 2021361
注册: 2012-09-22
专业: 流行病学方法与卫生统计

[求助] 克隆表达引物设计

急急急现在我知道某基因的全长要扩增全长引物怎么设计啊网上有这样说的：

1、从你的全长基因的正义链直接数出16-20个碱基（从ATG开始），然后在它的5‘端加上游酶切位点，如果需要的话加上保护碱基。
2、从你的全长基因的反义链从5’-3‘端直接数出16-20个碱基，后在它的5‘端加上游酶切位点，如果需要的话加上保护碱基。
这样引物就设计好了。
注意：上下游的酶切位点不要设计反了。

难道不用软件分析吗

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-5 at 09:46 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有50人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

1楼2013-07-04 15:48:58

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zhouking8758

木虫 (正式写手)

应助: 18 (小学生)
金币: 2418.5
散金: 27
红花: 2
帖子: 369
在线: 289.9小时
虫号: 691834
注册: 2009-01-12
专业: 生物大分子结构与功能

★ ★
gyesang: 金币+2, 感谢应助！ 2013-07-07 17:52:16

设计个引物都这么纠结。
对于楼主这种扩增基因全长的情况，一般只能从起始密码子开始设计上游引物，从终止密码子设计下游引物，而且必须要借助软件来评价引物之间的二级结构、引物二聚体和错配情况，尤其要注意错配率不要太高。当然，错配、二聚体、二级结构等是不可能都完全消除防护，但是可以通过改变上下游引物长度来尽可能的是的他们的自由能绝对值最小化。
设计引物的时候考虑好是否要加入tag和酶切位点，同时要注意不要移码。
建议楼主google一下，引物的设计相关资料。