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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆表达 引物设计
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ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] 克隆表达 引物设计

急急急  现在我知道某基因的全长 要扩增全长 引物怎么设计啊  网上有这样说的：


1、从你的全长基因的正义链直接数出16-20个碱基（从ATG开始），然后在它的5‘端加上游酶切位点，如果需要的话加上保护碱基。
2、从你的全长基因的反义链从5’-3‘端直接数出16-20个碱基，后在它的5‘端加上游酶切位点，如果需要的话加上保护碱基。
这样引物就设计好了。
注意：上下游的酶切位点不要设计反了。



难道不用软件分析吗

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-5 at 09:46 ]
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1楼 2013-07-04 15:48:58
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ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 小飞8675 at 2013-07-06 15:15:15
http://www.med66.com/html/ziliao/yixue/10/1f89a6014e659ecc77ec21b090eb5cbc.htm

这个链接 告诉扩增cDNA全长，并加上双酶切位点，保护碱基，请看一下

谢谢  那在这个链接里面 你有没有发现上游有一个碱基是对不上的
vpr基因：方向5’-----3‘
ATGGAACAATCCCCAGAAGATCAGGGGCCGCAGAGGGAACCACACAATGAATGGACACTA
GAGCTTCTAGAGGAGCTCAAGCAGGAAGCTGTCAGACACTTTCCTAGACCATGGCTTCAT
AGCTTAGGACAACATATCTATGACACATACGGGGATACTTGGGCAGGAGTGGAAGCCATA
ATAAGAACTCTGCAACAACTGCTGTTTATTCATTTCAGAATTGGGTGTCAGCATAGCAGA
ATAGGTATTTTGAGACAGAGAAGAACAAGAAATGGAGCCAGTAGATCCTAA

vpr-上游 5-CCCaagctt（保护碱基加酶切） ATGGAACAAGCCCCAGAAGA
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23楼2013-07-06 20:50:27
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bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能不用软件么，开玩笑~~
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-07-04 15:51:26
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bleach060452

新虫 (小有名气)
他只是极其简单的一说，复杂的地方一点没提，优化才是最恶心的~~必须有软件辅助的
赞一下 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心
3楼2013-07-04 15:56:31
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refreshing11

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-04 17:02:15
分析的余地比较小，因为你的序列已经固定，两端的序列都要扩增出来，没法选择了，不过如果不得已，可以考虑简并引物的使用。希望有帮助

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-04 15:56:37
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