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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blotting 显影曝光结果不理想，求高手指点
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aksand

银虫 (正式写手)

[求助] western blotting 显影曝光结果不理想，求高手指点

最近做western blotting每次到最后显影曝光结果都不是很理想，蛋白样品量有限，属于小分子蛋白22kd，抗体由国产换为进口抗体，ECL为Pierce的，显影液和定影液为博士德的。
求高手指点如何在蛋白浓度较低的样品中把WB做好？
显影定影曝光方面为手动暗室曝光，有什么好的实验技巧，求分享，谢谢！
也可以推介一下好的显影液和定影液，
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1楼 2013-07-01 21:39:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
aksand: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-07-02 14:36:16
引用回帖:
9楼: Originally posted by aksand at 2013-07-02 10:41:15
有什么好的手动曝光技巧，求分享哈！...

其实也算不上什么，就是暴光时间和显影时间在一定范围内是可以互相弥补的，就是在显影时，通过暗室中微弱的红光下随时观察胶片develop的情况，当隐约出现条带后终止显影。下次暴光的时候可以根据显影的速度缩短暴光时间。当然显影的速度也和显影液的新旧程度有关，如果用固定的时间显影可能会比较浪费胶片。这种手动显影定影已经很少了，很多地方用机器洗胶片，或者用荧光成像仪直接出图片。
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12楼2013-07-02 12:11:20
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aksand: 金币+3 2013-07-02 08:59:58
你说的不理想是什么情况？信号弱还是背景深？
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2楼2013-07-02 00:34:30
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aksand: 金币+5 2013-07-02 08:59:04
myprayer: 金币+1, 回答很好，perfect 2013-07-02 09:13:47
pierce也有个增强液可买，能够显着增强信号，但问题也来了，背景被曝的也深，不过你可以试试
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-07-02 02:41:29
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biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aksand: 金币+5 2013-07-02 08:58:56
aksand(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-02 09:13:29
多少浓度的胶？ 22kd 和light chain挺近的，如果为了增加信号抗体浓了，可能反而会被屏蔽。 你给个截图看看才知道怎么改进下
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4楼2013-07-02 08:03:53
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