应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切及构建载体问题
273/3返回列表上一页123
查看: 2461  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

f853012205

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by doughtiness at 2013-07-06 15:55:36
我做快两个月了...

好吧  要汇报了  什么都没做好   
赞一下 回复此楼
21楼2013-07-07 16:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

f853012205

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by doughtiness at 2013-07-06 15:55:36
我做快两个月了...

一直没有找到合适的载体  我的目的片段2766    T载体是2692   切的话跑不开   你的应该可以的  你的片段小
赞一下 回复此楼
22楼2013-07-07 16:27:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by doughtiness at 2013-07-06 15:55:36
我做快两个月了...

你快做两个月了，哪一步失败了，是片段酶切不下来，还是连不上载体？
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
23楼2013-07-07 17:43:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘洋2008

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 08:00:12
我也遇到类似情况，别听他们乱讲，如果载体本身就有你设计目标片段的酶切位点，那根本没办法酶切，只会将你连到T载体的连接产物分成2半，不信你试试！
赞一下 回复此楼
24楼2013-07-19 17:33:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘洋2008

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by chijing0225 at 2013-07-01 13:47:14
影响不大，你可以适当延长酶切时间，构建好的载体要再送测序确定一下是不是只有你的目的条带

我也碰到这种问题，你凭什么说影响不大，你试过吗？如果PMD18-T载体上也有这两个酶切位点，一定会切乱的，也许会将连在PMD18-T载体的质粒切成两半的！等你的解释，不懂就别误导人！我是个外行，但碰到过这种情况！
赞一下 回复此楼
25楼2013-07-19 17:48:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-21 08:00:21
引用回帖:
25楼: Originally posted by 飘洋2008 at 2013-07-19 17:48:28
我也碰到这种问题，你凭什么说影响不大，你试过吗？如果PMD18-T载体上也有这两个酶切位点，一定会切乱的，也许会将连在PMD18-T载体的质粒切成两半的！等你的解释，不懂就别误导人！我是个外行，但碰到过这种情况！...

切碎没有关系，回收你的那个片段就可以了，XbaI有甲基化的问题，如果被甲基化了，可能就切不开了，其余的，除非酶切位点靠的特别近，一般不会有问题
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
26楼2013-07-20 11:40:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kernim

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
现在构载体都不用t载体了，麻烦，可以直接构到目的载体上
赞一下 回复此楼
27楼2014-11-05 10:25:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 doughtiness 的主题更新
273/3返回列表上一页123
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭