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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切及构建载体问题
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f853012205

铁虫 (初入文坛)
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14楼: Originally posted by doughtiness at 2013-07-06 15:55:36
我做快两个月了...

好吧  要汇报了  什么都没做好   
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21楼2013-07-07 16:23:34
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f853012205

铁虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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14楼: Originally posted by doughtiness at 2013-07-06 15:55:36
我做快两个月了...

一直没有找到合适的载体  我的目的片段2766    T载体是2692   切的话跑不开   你的应该可以的  你的片段小
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22楼2013-07-07 16:27:06
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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14楼: Originally posted by doughtiness at 2013-07-06 15:55:36
我做快两个月了...

你快做两个月了，哪一步失败了，是片段酶切不下来，还是连不上载体？
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23楼2013-07-07 17:43:19
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飘洋2008

木虫 (著名写手)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 08:00:12
我也遇到类似情况，别听他们乱讲，如果载体本身就有你设计目标片段的酶切位点，那根本没办法酶切，只会将你连到T载体的连接产物分成2半，不信你试试！
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24楼2013-07-19 17:33:07
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飘洋2008

木虫 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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3楼: Originally posted by chijing0225 at 2013-07-01 13:47:14
影响不大，你可以适当延长酶切时间，构建好的载体要再送测序确定一下是不是只有你的目的条带

我也碰到这种问题，你凭什么说影响不大，你试过吗？如果PMD18-T载体上也有这两个酶切位点，一定会切乱的，也许会将连在PMD18-T载体的质粒切成两半的！等你的解释，不懂就别误导人！我是个外行，但碰到过这种情况！
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25楼2013-07-19 17:48:28
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-21 08:00:21
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25楼: Originally posted by 飘洋2008 at 2013-07-19 17:48:28
我也碰到这种问题，你凭什么说影响不大，你试过吗？如果PMD18-T载体上也有这两个酶切位点，一定会切乱的，也许会将连在PMD18-T载体的质粒切成两半的！等你的解释，不懂就别误导人！我是个外行，但碰到过这种情况！...

切碎没有关系，回收你的那个片段就可以了，XbaI有甲基化的问题，如果被甲基化了，可能就切不开了，其余的，除非酶切位点靠的特别近，一般不会有问题
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26楼2013-07-20 11:40:55
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kernim

金虫 (正式写手)
★
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现在构载体都不用t载体了，麻烦，可以直接构到目的载体上
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27楼2014-11-05 10:25:24
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