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wnj007881铁杆木虫 (正式写手)
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[求助]
求助能使活细胞内碱性磷酸酶升高或降低的诱导剂或抑制剂
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| 我现在做的一个荧光分子能与碱性磷酸酶结合，现在想人为调节活细胞内碱性磷酸酶含量的多少来测试荧光分子的响应，求助大家有什么诱导剂或抑制剂能改变细胞内碱性磷酸酶含量的。 |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-30 16:19:11
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-30 16:19:11
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外加抑制剂的方法，我想过，但是被我自己否决，理由：1.这种抑制剂很难说能够直接进入细胞；2.不能直接进入细胞就要显微注射，或者脂质体融合，这步本身就不比RNA干涉简单；3.及时加入了抑制剂，只是改变了酶的功能，酶分子本身依然存在，也就是失活的酶分子依然会与荧光分子发生交联；4，即使能偶找到细胞內源的目的酶的抑制多肽的基因导入细胞，这步本身就不比RNA干涉简单，而且仍然不能减少细胞内的目的酶的绝对数量，所以即使酶失活，也不能保证失活的酶分子就不与荧光分子发生交联。 所以只有使细胞内的的酶分子的绝对总数降下来，但是还存在，然后才能检测细胞内的酶分子的数量与荧光分子发生交联的情况。 而且RNA干涉是需要从数据库查阅有关基因的siRNA作用的敏感位点，而后化学合成siRNA，然后转染细胞，筛选出阳性克隆，大规模培养，导入荧光分子，总体难度并不是很大。 你要直接注射入外来的酶抑制剂，除非能够同时降解目的酶本身，否则这样设计实验没有意义，不会有结果。 |
8楼2013-06-29 17:38:57
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3楼2013-06-28 14:19:49
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4楼2013-06-28 15:22:48