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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 欲PCR扩增4200bp左右的目的片段，一直得不到目的条带，求高人指教！
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)

[求助] 欲PCR扩增4200bp左右的目的片段，一直得不到目的条带，求高人指教！ 已有2人参与

本人欲PCR扩增一4200bp左右的目的基因片段，用过TaKaRa的LA酶、HS Taq酶，用过全式金的FastPfu Fly DNA Polymerase均无目的条带，很是郁闷，跑电泳时用0.5%的胶，100V跑25min，但加样孔处一直有很亮的一团，请高手指点，我怎样才能扩增出目的条带？？
欲PCR扩增4200bp左右的目的片段，一直得不到目的条带，求高人指教！
小木虫.jpg

[ Last edited by 卓尔不凡2012 on 2013-6-22 at 20:02 ]
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1楼 2013-06-22 20:00:51
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qiuqu_200212

至尊木虫 (知名作家)

无助又无奈

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 同意 2013-06-24 07:51:32
卓尔不凡2012: 金币+1 2013-06-24 15:43:25
模版尽量是25微升体系，1微升也较多了。
还有就是尽量用酶活性大的公司酶。宝生物的酶活性是较低的品种。
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无奈又无助的天鹅，孤零零
6楼2013-06-23 12:57:28
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overhalfmoon

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
卓尔不凡2012(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 12:34:06
卓尔不凡2012: 金币+1 2013-06-24 15:43:10
试试少一点模板，或者稀释你的模板。先稀释20-50倍试试
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2楼2013-06-22 21:25:52
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卓尔不凡2012

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by overhalfmoon at 2013-06-22 21:25:52
试试少一点模板，或者稀释你的模板。先稀释20-50倍试试

20微升的体系，模板用了2.5微升，我是按照TaKaRa的LA Taq说明书加的。
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3楼2013-06-22 21:40:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-23 12:34:17
你的模板定浓度了吗？PCR能看到模板说明模板用量太大了。
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4楼2013-06-23 01:34:35
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