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lxyyzz木虫 (小有名气)
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求助分子克隆问题——挑不出阳性克隆！ 已有1人参与
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分子克隆两个酶切位点是AgeI和XhoI，酶切6h后回收。 载体跑胶，看到的切割条带和预想的一样，8000bp和2000bp，选取8000bp的条带切胶回收。载体和片段回收后也跑过胶，大小位置都是对的。做了好几次都没有阳性克隆，长出的克隆都没有插入片段。 后来我只取了回收后的载体，同样加入连接酶连接转化后，发现板上也长了克隆！大概十几个左右的样子。我很不理解，按照道理说回收后的载体是线性的，并带有两个不同的粘性末端，应该不会再成环啊，为什么还能长的出克隆呢？ 请高人帮忙解释下，给点建议！我是真不知道这种情况该怎么办了。 |
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