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RAW264.7细胞的培养问题-----传代、冻存和复苏 已有1人参与
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RAW264.7细胞的培养总遇到问题。 这个细胞我是从别人那里要的。 第一次要来之后，冻存了一批，在-80℃中可以复苏成功，于是把种子细胞扔掉了，并且把冻存细胞转入液氮。后来药品到了，复苏细胞做实验时，却怎么都不能成功。 第二次厚着脸皮跟别人又要来一次，回来了大量扩增冻存，转入液氮。这次留了一个心眼，种子细胞没有丢掉。但是现在转入液氮的细胞怎么都不能复苏成功，种子细胞已经传到10次以上，生长速度变得很慢，状态倒是还可以。 有没有在培养RAW264.7细胞方面很有经验的前辈给我传授下经验？？本人万分感谢。 我的传代方法：弃去旧培养液，加入新鲜的培养液，用移液器反复吹打，然后一分为二转至两个新平皿，每皿补足5ml的培养体积。 我的冻存方法： 冻存液是血清：DMSO=9:1。冻存采用 4℃20min, -20℃20min,-80℃过夜，然后转入液氮。 我的复苏方法：从液氮中取出冻存的细胞，37-39℃下快速融化冻存的细胞液，用PBS缓冲液1500rpm离心3min，弃上清，用5ml培养基将细胞沉淀吹匀。 每次从液氮中复苏的细胞都死掉，几乎不能存活。但是之前有一次从-80℃中却可以成功复苏。现在等着用它来多肽对内毒素的抑制活性，愁死了。 希望好心人帮一下。 |
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16楼2019-02-20 15:38:45
wolfman840
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