| 查看: 603 | 回复: 0 | |||
[求助]
求助，急，谢谢！
|
|
大家好！最近在使用荧光定量PCR对某个基因进行分析。当时设计PCR引物时，是使用NCBI设计的。使用阳性的cDNA进行PCR后，得到的条带也与目的条带相符。最近想通过TA克隆的方法对各引物进行验证，但是克隆及测序均不成功，请问到底是什么原因呢？自己百思不得其解，想请教大家，帮下忙，急呢，谢谢！ 1. 下面是确定阳性cDNA验证的结果，D8、L816代表两个cDNA（1.jpg） 2. 下一步以验证的阳性cDNA进行PCR（目的条带均小于200bp，且与设计的预测扩增片段大小相符）--（2.jpg） 3. 然后切胶回收，并连接至PMD19T载体上，之后便是转化至感受态DH5ɑ中 4. 最后通过蓝白斑筛选，挑斑，摇菌扩增培养， 使用M13对菌液进行PCR扩增 总结：蓝白斑筛选过程中，不知道我连接成功没有？主要的问题还出现在对菌液进行验证一步，因为目的条带小，我不知道怎样设计阳性、阴性对照，同时，我第一次PCR检测后将似乎是阳性的菌液（就是目的条带+200bp左右）送测序，但是奇怪的是：通用引物（华大）测序结果比对竟然是PUC系列克隆载体类似的结果。我不知道怎样来进行验证了，急啊， 谢谢了，请大家帮忙，谢谢了。 请问：怎样对荧光定量引物进行验证呢？其次，TA克隆后测序怎么我的不成功呢？  1.jpg  2.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有186人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
极性求助急谢谢
已经有3人回复
- 丁基锂DMF上醛基，求助，急啊，谢谢
已经有8人回复
- 求助翻译，急！谢谢！
已经有2人回复
- DSC求助，急求，谢谢师兄师姐啦！！
已经有3人回复
- 求助：中文翻译英文，急用，谢谢！！
已经有1人回复
- 求助：英文翻译中文，急用，谢谢
已经有1人回复
- 十万火急！！！！！求助， 谢谢
已经有8人回复
- 投稿回来，晶体解析部分不会回答，求助高手，毕业急，谢谢
已经有7人回复
- 求助Origin怎么在图中显示数据点的具体值，谢谢！急！！！！！！！！
已经有8人回复
- 投分析科学学报求助，急急急！！！谢谢大家了
已经有4人回复
- J1签证约束力证明材料，在线急等求助，谢谢！
已经有10人回复
- 求助翻译语句，急用，谢谢！
已经有1人回复
- 求助，投稿要求中的表格问题，头大，急，谢谢帮助！
已经有6人回复
- 急。求助翻译。质量一般就行，不要机译。谢谢
已经有4人回复
- 【求助】关于国内外导师介绍签名问题（急，谢谢大家啦！）
已经有16人回复
- 【求助/交流】急！当前世界上的分子生物学水平，谢谢
已经有10人回复
- 翻译求助 急用 谢谢
已经有3人回复
- 【求助】请教图像处理问题，急，谢谢各位了
已经有7人回复
- 紧急求助，谢谢大家了
已经有14人回复
- 摘要翻译求助（汉译英）！急，谢谢哦！
已经有11人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
