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hellohuo

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆基因,用PMD19-T载体转天根的感受态细胞,菌落少,测的序列全是空载体,求原因· 已有1人参与

克隆基因,用PMD19-T载体,天根的感受态细胞,进行转化,可是涂板之后,菌落少,测的序列全是空载体,求教:会是哪些原因导致的?我的目的基因片段大概3-4K左右,是不是和片段大小有关?
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-06-26 12:37:02
做完连接以后没有鉴定就去测序了?
一般会选择下面任何或者同时的方法去鉴定,然后再送去测序:
1. 菌落PCR
2.提质粒,做酶切
一般推荐第一种吧。确定你的片段在载体上以后再去测序。
天道酬勤
7楼2013-06-21 09:13:01
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zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hellohuo(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 17:07:53
3~4K是有点大,最好是16℃过夜。
做蓝白筛选,减少假阳性。
感受态也会有影响,可以做一个阳性对照。
每个年龄都有其最应该做的事,但只有过了那个年龄自己才知道
2楼2013-06-19 16:06:17
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hellohuo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-06-19 16:06:17
3~4K是有点大,最好是16℃过夜。
做蓝白筛选,减少假阳性。
感受态也会有影响,可以做一个阳性对照。

感受态也会有影响吗?还有一个问题,就是如果抗生素加的会多一些,对菌落的形成是不是也有一定的影响?
3楼2013-06-19 16:58:47
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dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 17:08:02
你的Taq酶是什么牌子,p产物有A 尾巴吗?
还有就是检查你的T4酶,是否活性足够高。
★穷则独善其身,达则兼济天下★
4楼2013-06-19 17:03:22
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