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hellohuo

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆基因，用PMD19-T载体转天根的感受态细胞，菌落少，测的序列全是空载体，求原因· 已有1人参与

克隆基因，用PMD19-T载体，天根的感受态细胞，进行转化，可是涂板之后，菌落少，测的序列全是空载体，求教：会是哪些原因导致的？我的目的基因片段大概3-4K左右，是不是和片段大小有关？
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1楼 2013-06-19 15:39:50
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那叫棒

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hellohuo at 2013-06-21 09:33:15
做过菌落PCR，看到有条带，然后送去测序，结果都是空载体。估计是因为载体自连之后的片段大小和我的目的基因的大小差不多吧···所以我在纠结究竟是哪里出了问题~...

我想问一下，用这个载体链接，DNA 加的量怎默算
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22楼2018-11-13 13:36:24
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zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hellohuo(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 17:07:53
3~4K是有点大，最好是16℃过夜。
做蓝白筛选，减少假阳性。
感受态也会有影响，可以做一个阳性对照。
赞一下 回复此楼
每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
2楼2013-06-19 16:06:17
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hellohuo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-06-19 16:06:17
3~4K是有点大，最好是16℃过夜。
做蓝白筛选，减少假阳性。
感受态也会有影响，可以做一个阳性对照。

感受态也会有影响吗？还有一个问题，就是如果抗生素加的会多一些，对菌落的形成是不是也有一定的影响？
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3楼2013-06-19 16:58:47
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dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-19 17:08:02
你的Taq酶是什么牌子，p产物有A 尾巴吗？
还有就是检查你的T4酶，是否活性足够高。
赞一下 回复此楼
★穷则独善其身,达则兼济天下★
4楼2013-06-19 17:03:22
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