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飞燕-五星岩

金虫 (小有名气)

[求助] 色谱峰前沿与拖尾

想问各 位大师,用氨水调流动相的PH与用三乙胺调流动相的PH有啥区别吗?本人现在用的流动相用氨水调PH,由于柱子有点前沿且拖尾,请问我可不可以用三乙胺代替氨水调PH啊?急急急
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,不同的缓冲液都有自己相应的pKa值,你用该缓冲液来调pH值的时候,也要考虑到它的pKa值是否落在你的待测物的正负2之间,只有那样才能确保你的待测物不被解离。至于你说峰型不好,可能就是pH值调的范围有点问题,你可以微调试一试。
2楼2013-06-21 09:26:40
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飞燕-五星岩

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by raulsam1984 at 2013-06-21 09:26:40
楼主,不同的缓冲液都有自己相应的pKa值,你用该缓冲液来调pH值的时候,也要考虑到它的pKa值是否落在你的待测物的正负2之间,只有那样才能确保你的待测物不被解离。至于你说峰型不好,可能就是pH值调的范围有点问题 ...

谢谢大师,,不过我还想说一下,我那缓冲盐里有离子对试剂——四丁基氢氧化铵,它对柱子伤害比较大,且我的缓冲盐的PH 要求9.5.我用新柱子刚开始峰都挺好,用几天后峰形就不好看了,前沿加拖尾,请问有啥办法可是我的色谱柱使用期延长一下?
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3楼2013-06-22 10:28:28
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yan1984

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

换耐碱性的色谱柱。
4楼2013-06-22 23:09:33
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

应该是你的色谱柱出问题了,建议用agilent的extend试试
5楼2013-06-24 09:33:33
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞燕-五星岩 at 2013-06-22 10:28:28
谢谢大师,,不过我还想说一下,我那缓冲盐里有离子对试剂——四丁基氢氧化铵,它对柱子伤害比较大,且我的缓冲盐的PH 要求9.5.我用新柱子刚开始峰都挺好,用几天后峰形就不好看了,前沿加拖尾,请问有啥办法可是我 ...

楼主,你缓冲盐的pH值范围可能超过你的色谱柱的耐受范围了,色谱柱可能有损坏了,因为一般的c18柱pH范围是2-8,导致峰型变差的原因可能是这个。你最好买一根耐受范围广一点的柱子。菲罗门跟waters都有这类柱子卖。
6楼2013-06-24 09:45:25
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飞燕-五星岩

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by raulsam1984 at 2013-06-24 09:45:25
楼主,你缓冲盐的pH值范围可能超过你的色谱柱的耐受范围了,色谱柱可能有损坏了,因为一般的c18柱pH范围是2-8,导致峰型变差的原因可能是这个。你最好买一根耐受范围广一点的柱子。菲罗门跟waters都有这类柱子卖。...

谢谢楼主,我用的thermo色谱柱,ODS-2,它适合的PH为1-10,做小浓度的(几ug)还行,大浓度供试品(1mg/ml)第一针还行,第二针就不行了,我方法学还没有做完呢,现在换别的厂家的别的型号的柱子,行不啊?
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7楼2013-06-24 10:35:59
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 飞燕-五星岩 at 2013-06-24 10:35:59
谢谢楼主,我用的thermo色谱柱,ODS-2,它适合的PH为1-10,做小浓度的(几ug)还行,大浓度供试品(1mg/ml)第一针还行,第二针就不行了,我方法学还没有做完呢,现在换别的厂家的别的型号的柱子,行不啊?...

大浓度的,估计是浓度太大,色谱柱过载了。换别的柱子可以,就是要做一个耐用性的实验,看两根柱子上测的含量RSD值是否小于2%。
8楼2013-06-24 10:46:55
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飞燕-五星岩

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by raulsam1984 at 2013-06-24 10:46:55
大浓度的,估计是浓度太大,色谱柱过载了。换别的柱子可以,就是要做一个耐用性的实验,看两根柱子上测的含量RSD值是否小于2%。...

好的,谢谢楼主!
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9楼2013-06-24 13:45:59
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