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zuihouyizhan

金虫 (小有名气)

[求助] 细菌属种鉴定问题

想请教大家一下,通过16sDNA片段的扩增,测序比对能精确到种吗?之前一直认为是可以的,所以用这种方法鉴定菌株几个月了,可近期发现,序列相似度很高的菌株,菌落形态差好多,不知是我操作问题还是这种鉴定16s鉴定菌种的方法不可靠,求专家指点
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zuihouyizhan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by qiaolinkun at 2013-06-18 20:40:29
我也遇到相同的问题,两种菌落形态相差很大的菌,blast结果居然是同种!我尝试使用过不同基因序列库进行检索,结果也不相同。询问专家意见是要结合生化反应与血清学鉴定,blast理论上能精确到亚种,但其序列都是开放 ...

哦,这样呀,可是每株都做生化反应那工作量太多了,我是做细菌多样性的,这样一下子不知咋办了
3楼2013-06-19 11:11:30
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普通回帖

qiaolinkun

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖应助! 2013-06-18 20:55:23
zuihouyizhan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-19 11:13:40
我也遇到相同的问题,两种菌落形态相差很大的菌,blast结果居然是同种!我尝试使用过不同基因序列库进行检索,结果也不相同。询问专家意见是要结合生化反应与血清学鉴定,blast理论上能精确到亚种,但其序列都是开放性的,不一定都是已发表的序列,可信度不是最高。而且实验时有可能存在片段交叉污染,比如DNA的气溶胶也有可能会对PCR产生一定影响的。
2楼2013-06-18 20:40:29
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2981249

至尊木虫 (文坛精英)

木有

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zuihouyizhan: 金币+5 2013-06-20 10:41:19
16S太保守,很多时候只有一个它的序列很难定位到种,不能完全区分开同属不同种的细菌,建议楼主再扩一下其他持家基因

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
帅是一种态度
4楼2013-06-19 23:06:29
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WiLi_胖纸

铜虫 (初入文坛)


zhangxingc: 金币+1, 鼓励新虫发帖应助,欢迎常到微生物版 2013-06-20 09:02:21
16sDNA片段的扩增结果,直接测序比对结果不全面, 因为最开始跟最末位的20-30个序列的准确性相当低,应做克隆测序,所得结果经行比对,毕竟在论文中克隆测序才是被承认的。。
5楼2013-06-20 09:01:03
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zuihouyizhan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by WiLi_胖纸 at 2013-06-20 09:01:03
16sDNA片段的扩增结果,直接测序比对结果不全面, 因为最开始跟最末位的20-30个序列的准确性相当低,应做克隆测序,所得结果经行比对,毕竟在论文中克隆测序才是被承认的。。

啊????不是吧,只有克隆测序才被承认?????
6楼2013-06-20 10:39:26
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zuihouyizhan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 2981249 at 2013-06-19 23:06:29
16S太保守,很多时候只有一个它的序列很难定位到种,不能完全区分开同属不同种的细菌,建议楼主再扩一下其他持家基因

嗯,谢谢你的建议,现在只能这样先往下做的,到时候在回头做持家,哎,各种没时间呀
7楼2013-06-20 10:41:12
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zlq12

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
16S rDNA序列比对,是不可以鉴定到种的,只能确定细菌的属,然后再做一些其它的生理、生化试验,才能确定所属的种类,楼主可以参考一下发表的有关新种的文章!
8楼2013-06-21 09:51:06
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见神一笑

木虫 (著名写手)

跟你的菌相似度最高的菌株都是以发表的标准菌株吗?如果不是的,就像楼下所说的,可信度不高。而且下面的同仁说得对,要发表必须要克隆测序,才能得到尽可能长的准确的序列。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

好好努力
9楼2013-06-21 10:18:11
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zuihouyizhan

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 见神一笑 at 2013-06-21 10:18:11
跟你的菌相似度最高的菌株都是以发表的标准菌株吗?如果不是的,就像楼下所说的,可信度不高。而且下面的同仁说得对,要发表必须要克隆测序,才能得到尽可能长的准确的序列。

我只是做个细菌多样性不需要发表新种的,要是每个都做克隆生理生化的话那就太麻烦了,我只是简单的用可培养的方法研究海洋细菌多样性,哎,现在各种纠结,那只能做到属了,还有就是我之前做克隆,片段长度也就是1500bp
10楼2013-06-23 09:28:16
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